[发明专利]一种IL-1信号通路响应元件及其应用

说明书

本发明公开了一种IL‑1信号通路响应元件及其应用，本发明制备了一种稳定表达IL‑1信号通路响应元件报告基因的效应细胞，用IL‑1α和IL‑1β刺激激活报告基因表达，并用IL‑1Ra阻断IL‑1信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定蛋白生物学活性。本发明针对IL‑1α、IL‑1β、IL‑1Ra药物生物学活性测定建立了快速、准确更加灵敏的检测方法，实验周期短，操作简洁，并且也减少由于长时间孵育细胞过程中的客观因素造成的偏差。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体地，涉及一种IL-1信号通路响应元件及其应用。

背景技术

白介素1(interleukin 1，IL-1)是人类最早发现的细胞因子之一。它是一组激素样肽 类物质，它具有广泛的生理作用，如维持内环境的稳定、抗感染、抗肿瘤和促进造血等， 在细胞因子网络中占据重要位置。IL-1家族成员由IL-1α、IL-1β和白细胞介素-1受体拮抗 剂(interleukin-1 receptor antagonist，IL-1Ra)三者组成。IL-1Ra是IL-1α、IL-1β共同的拮 抗剂，它的蛋白质序列与IL-1α、IL-1β在受体结合部位即C-末端区显著相似。IL-1Ra通 过与IL-1受体结合竞争性抑制IL-1生物学活性且具有剂量依赖关系。

美国食品药品监督管理局(FDA)在2001年11月批准Amgen公司的rh-IL-1Ra上市，治疗常规药物无效的顽固性类风湿性关节炎。rh-IL-1Ra的生物学活性是通过抑制IL-1的活性来体现的，是目前发现的天然存在的细胞因子竞争性抑制剂，是机体避免炎症反应过度而形成的自然拮抗机制。

目前IL-1、IL-1Ra和IL-1抗体的生物学活性测定方法主要是细胞增殖抑制的方法， 该方法主要是依据IL-1对A375-S2细胞的杀伤呈现剂量依赖性。该方法一般37℃孵育72h～120h，实验周期长，变异性较大。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种IL-1信号通路响应元件及其 应用。

本发明的第一个目的是提供一种IL-1信号通路响应元件。

本发明的第二个目的是提供一种重组载体。

本发明的第三个目的是提供一种重组细胞。

本发明的第四个目的是提供一种检测IL-1α或IL-1β的生物学活性的方法。

本发明的第五个目的是提供一种白细胞介素-1受体拮抗剂结合IL-1α或IL-1β的生物 学活性的方法。

本发明的第六个目的是提供所述的IL-1信号通路响应元件、所述的重组载体，和/或 所述的重组细胞在检测具有白细胞介素-1受体拮抗剂、IL-1α或IL-1β的生物活性的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

HepG2细胞属于人的肝癌细胞，其表面表达有IL-1R(白细胞介素-1受体)，IL-1与IL-1R 结合，通过IRAK蛋白激活IL-1信号通路响应元件；将含有核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的IL-1信号通路响应元件和荧光素酶报告基因的质粒pGL-4.11-IL1RE质粒入HepG2细胞内，

由于IL-1与IL-1R结合后激活IL-1信号通路响应元件，并启动与响应元件连接的荧 光素酶报告基因的表达。IL-1Ra与IL-1竞争性结合IL-1R，阻断IL-1信号通路，因此IL-1Ra 浓度与效应细胞的荧光素酶表达量成反比，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确 定IL-1Ra抗体生物学活性，通过比较样品与参比品四参数曲线的半数抑制浓度，得出相 应的效价。

因此本发明要求保护以下内容：

一种IL-1信号通路响应元件，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。