[发明专利]一种提取赤拟谷盗或雷氏黄萤线粒体的方法在审
| 申请号： | 202111088626.9 | 申请日： | 2021-09-16 |
| 公开（公告）号： | CN113736724A | 公开（公告）日： | 2021-12-03 |
| 发明（设计）人： | 张棋麟;杨晓洁;袁明龙;郭军;应建平;赵梓舜;朱欠华;章燕玫 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 昆明同聚专利代理有限公司 53214 | 代理人： | 苏芸芸 |
| 地址： | 650093 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提取 赤拟谷盗 雷氏黄萤 线粒体 方法 | ||
1.一种提取赤拟谷盗或雷氏黄萤线粒体的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）在赤拟谷盗成虫或雷氏黄萤幼虫中添加STE缓冲液混匀后，4℃下匀浆，制得匀浆液，匀浆液在4℃、1000～1200g下离心5min，收集上清液在4℃、1000～1200g下离心5min，收集上清液在4℃、12000～15000g下离心10min，收集沉淀，得到粗提线粒体；
（2）将粗提线粒体用预冷至4℃的25%Nycodenz溶液悬浮，得到粗提线粒体悬浮液，在离心管中将密度梯度介质铺层，即沿管壁缓慢依次加入密度梯度介质1mL 34%Nycodenz溶液、1.6mL30% Nycodenz溶液、2.4mL粗提线粒体悬浮液、1.6mL 23%Nycodenz溶液、0.6mL 20%Nycodenz溶液，然后进行密度梯度离心，收集处于20%和23%溶液之间条带的溶液，该溶液经4℃、12000～15000g离心10min，收集沉淀，即得赤拟谷盗或雷氏黄萤的线粒体。
2.根据权利要求1所述的提取赤拟谷盗或雷氏黄萤线粒体的方法，其特征在于：密度梯度离心是在4℃、100000g下离心1～1.5h。
3.根据权利要求1所述的提取赤拟谷盗或雷氏黄萤线粒体的方法，其特征在于：STE缓冲液是将150mL 100mmol/L三羟甲基氨基甲烷溶液与150mL 10mmol/L乙二胺四乙酸二钾溶液混合，然后添加蔗糖164.3g，混匀后调节pH为7.4，制得。
4.根据权利要求1所述的提取赤拟谷盗或雷氏黄萤线粒体的方法，其特征在于：密度梯度介质用STE缓冲液配制。
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