[发明专利]一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒。该试剂盒的引物探针组合，通过扩增引物对及检测探针的巧妙设计，避免了多个引物对及对应的检测探针之间的相互干扰，并经验证使用上述引物探针组合检测SERPINB7基因突变，特异性好，灵敏度高。此外，本申请试剂盒基于通用荧光定量PCR平台，设备成本低、普及性高，操作简单，结果易判读，全程闭管无污染，更可一次检测4个致病性突变位点。

技术领域

本发明属于体外核酸检测技术领域，涉及一种人SERPINB7基因突变快速分型的检测试剂盒，其中包括特异性的引物探针组合物及配套试剂，以及适用于该试剂盒的检测方法。

背景技术

长岛型掌跖角化症(Nagashima-type palmoplantar keratosis，NPPK，OMIM615598)属于弥漫性非残毁性掌跖角化病，是一种常染色体隐性遗传的掌跖角化病(PPK)，属于弥漫性非表皮松解性掌跖角化症，是中国汉族人群最常见的掌跖角化症类型。该病于1977年首次在长岛被报告，其发病率相对较高，在我国汉族人群中发病率约3.1/10000。NPPK的致病基因目前已明确为丝氨酸蛋白酶抑制剂B7(serpinfamilyB，SERPINB7)。

SERPINB7基因位于18q21.3，共有8个外显子，起始密码子位于2号外显子，终止密码子位于8号外显子，编码380个氨基酸。目前已报道SERPI NB7基因上NPPK致病突变有:c.796C＞T，c.218_219del AGinsTAAACTTTACCT，c.455-1G＞A，c.455G＞T，c.650-653delCTGT，c.522-523insT，c.336+2T＞G，c.122_127delTGGTCC，c.830C＞T，c.382C＞T，c.635delG，c.271delC，c.1136G＞A，其中c.796C＞T突变频率最高，通过千人基因组数据库，c.796C＞T在中国正常人群中的携带频率为6/197。

NPPK临床表现为皮肤红斑基础上轻度角化，临床特征为手掌、手背、腕部、足底、足背、踝部、跟腱等部位出现红斑、丘疹、斑块、角化、脱屑，伴手足多汗症，易伴发皮肤浅表真菌感染，多数患者伴有掌跖多汗和/或掌跖部位异味^[2-3]。目前尚未找到根治NPPK的治疗方法，维甲酸类药物如维A酸软膏、他扎罗汀或激素软膏如丙酸氯倍他索霜，合并真菌感染联合抗真菌药物，这些治疗方法能缓解该患者的病情，但停药后容易复发^[6]。

目前，针对SERPINB7基因突变的检测主要依赖于sanger测序。这一方法的基本原理是通过PCR扩增后，将获取的目的基因片段进行sanger测序，根据测序结果，分析是否存在致病性SERPINB7基因突变。该方法的不利之处在于实验操作复杂、时间久、结果分析需要相应的专业知识、检测成本相对较高。因此高效、快速、操作简便的实时荧光定量PCR成为分子诊断领域的主要方法。

根据NCBI dbSNP数据库数据，本试剂盒所检测4个位点：c.796CT(rs142859678)、c.522_523insT(rs672601344)、c.650_653delCTGT(rs534014297)、c.806_818delinsT(rs1157759655)在正常东亚人群中的突变型等位基因频率分别为：0.0119、0.0032、0.003、0.0006，据此计算，上述四个位点在人群中的携带率约为3.7/100。

[1]Nagashima M.Handbook of Human Genetics[M].Tokyo:Igaku Shoin,1977:23-27.

[2]Kabashima K，Sakabe J，Yamada Y，et al.“Nagashima-type”keratosis as anovel entity in the palmoplantar keratoderma category[J].A rch Dermatol，2008，144(3):375-379.