[发明专利]金刚烷胺半抗原、金刚烷胺抗原、制备方法以及金刚烷胺单克隆抗体及金刚烷胺检测试剂盒

说明书

本发明提供了金刚烷胺半抗原A或B。经过本发明的制备方法逐步制备金刚烷胺抗原A或B。然后获得抗金刚烷胺单克隆抗体3G7，使用上述组分制备的金刚烷胺ELISA检测试剂盒和金刚烷胺生物芯片检测试剂盒，能高灵敏度和高选择性检测多种样品中的金刚烷胺，灵敏度高于国标检测方法的最低检测限，且具有快速、简便、价廉的特点。

技术领域

本发明涉及金刚烷胺半抗原、金刚烷胺抗原、其制备方法、及其免疫筛选的杂交瘤细胞、单克隆抗体，以及用金刚烷胺抗原、单克隆抗体制备的金刚烷胺ELISA检测试剂盒、金刚烷胺生物芯片检测试剂盒、制备方法与应用，属于生物技术领域。

背景技术

金刚烷胺(Amantadine)属于三环胺类，是最早用于治疗流感的抗病毒药物。美国于1966年批准其作为预防用药，1976年在预防药的基础上确认其为治疗用药。在畜禽养殖中，其主要用于治疗和预防鸡禽流感以及猪传染性胃肠炎的防治，但是长期服用金刚烷胺会导致嗜睡、眩晕、抑郁、恶心等毒副作用，我国原农业部560号公告中己明令禁止金刚烷胺和金刚乙胺等抗病毒药物用于畜禽养殖业，美国FAD也已明确禁止在畜禽养殖中使用此类药物。然而，2012年媒体曝出国内养殖的“速生鸡”从孵出到端上餐桌只需45天，不法商贩为了进一步缩短养殖周期，让原本已经是速成品种的白羽鸡长得更快，偷偷喂食了包括金刚烷胺等抗病毒药品和地塞米松等激素类药品，使得禽肉等消费产品对人的食品安全造成严重威胁。

传统的金刚烷胺药物残留的检测方法主要是高效液相-质谱检测法、气相色谱法、高效液相法、气相-质谱联用检测法等，但由于其需要复杂的前处理过程和昂贵的仪器设备，且需要专业的操作人员等，使得这些方法都无法满足现场检测对快速、准确的要求。

免疫分析法可以弥补上述检测方法的缺点。免疫分析法是基于抗原抗体特异性结合的反应，检测各种物质(如药物、激素、蛋白质、微生物等)的分析方法，具有高灵敏度和高选择性等特点，且其检测成本低、速度快、准确，适用于现场的大量样本的快速筛选。但金刚烷胺作为禁用药物，现有的关于免疫分析方法的文献资料报道和市场产品中，鲜有产品的灵敏度高于国标检测方法的最低检测限(1ppb)的，因此迫切需要建立更加快速、简便、价廉、灵敏、特异的金刚烷胺筛选方法。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了金刚烷胺半抗原、其能制备金刚烷胺抗原。

本发明还提供了金刚烷胺抗原，其能制备与金刚烷胺进行抗原抗体反应的单克隆抗体，以及作为制备金刚烷胺检测试剂盒的包被原。

本发明还提供了能高灵敏度和高特异性结合金刚烷胺的单克隆抗体。

本发明还提供了能高灵敏度和高特异性结合金刚烷胺的可变区序列。

本发明还提供了能高灵敏度和高特异性结合金刚烷胺的抗体和抗体片段。

本发明还提供了能分泌高灵敏度和高特异性结合金刚烷胺的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明还提供了能高灵敏度和高特异性检测金刚烷胺的金刚烷胺ELISA检测试剂盒。

本发明还提供了灵敏度高于国标检测方法的最低检测限(1ppb)的检测金刚烷胺的金刚烷胺ELISA检测试剂盒。

本发明还提供了能高灵敏度和高特异性检测金刚烷胺的金刚烷胺生物芯片检测试剂盒。

本发明还提供了灵敏度高于国标检测方法的最低检测限(1ppb)的检测金刚烷胺的金刚烷胺生物芯片检测试剂盒。

附图说明

图1为金刚烷胺半抗原A的质谱；

图2为金刚烷胺半抗原B的质谱；

图3为牛血清白蛋白BSA的Maldi-Tof-Ms；

图4为金刚烷胺抗原A的Maldi-Tof-Ms；