[发明专利]一种同时检测维生素K1、MK4和MK7的方法

权利要求书

1.一种同时检测维生素K1、MK4和MK7的方法，其特征在于，包括以下步骤：

取生物样品，加入三种待测物的同位素内标混合溶液，再加入提取溶剂提取，离心，取上清液干燥后用复溶液溶解，得到待测样品，采用液相色谱串联质谱法检测；

所述液相色谱串联质谱法所采用的色谱柱为C18色谱柱，所述C18色谱柱为粒径1.7μm，内径2.1mm，长度50mm的BEH C18色谱柱；

流动相：A相为含0.2wt%甲酸的水溶液，B相为含0.2wt %甲酸的甲醇溶液；进样量10 μL；柱温为45℃；流速为0.5mL/min；

采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的程序包括：

0~0.5min，流动相B的体积百分比为90%；

0.5~1min，流动相B的体积百分比由90%升高到97%；

1~2min，流动相B的体积百分比由97%升高到100%；

2~4.5min，流动相B的体积百分比为100%；

4.5~5.6min，流动相B的体积百分比由100%降低到90%；

5.6~6min，流动相B的体积百分比为90%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取溶剂为正己烷；所述生物样品为血浆、血清、脑脊液或尿液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述三种待测物的同位素内标混合溶液为：含有1.0~1.6ng/mL VK1-d7、0.8~1.4ng/mL MK4-d7和1.0~2.5 ng/mLMK7-d7的乙醇溶液；所述复溶液为甲醇或含甲酸的甲醇溶液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述生物样品和同位素内标混合溶液的体积比为1：1~3；和/或，所述生物样品和复溶液的体积比为1 ： 0.20~1.0。

5.根据权利要求1~3任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱法的质谱参数包括：

VK1定量离子对：451.4/187.2；

VK1定性离子对：451.4/199.2；

VK1-d7内标离子对：458.5/194.1；

MK4定量离子对：445.2/187.1；

MK4定性离子对：445.2/227.1；

MK4-d7内标离子对：452.3/194.1；

MK7定量离子对：649.5/187.1；

MK7定性离子对：649.5/227.2；

MK7-d7内标离子对：656.6/194.1；

采用APCI离子源，正离子模式，多重反应监测离子扫描模式。