[发明专利]一种半红树植物黄槿的组织培养方法

权利要求书

1.一种半红树植物黄槿的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体选择与消毒：以幼嫩的黄槿茎尖作为外植体，并用自来水水洗干净后进行消毒处理；

(2)愈伤组织形成：将消毒后的黄槿茎尖接入诱导培养基，诱导生成愈伤组织；所述诱导培养基为2/3MS培养基+2.0mg/L 6-BA+0.20mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH6.0；

(3)丛生芽诱导形成：将所得愈伤组织转接到分化培养基中，诱导丛生芽分化；所述分化培养基为2/3MS培养基+2.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH6.0；

(4)丛生芽继代培养：将单个丛生芽转接到继代培养基中，增殖培养；所述继代培养基为1/2MS培养基+2.0mg/L 6-BA+0.10mg/LNAA+28g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH6.0；

(5)根诱导形成：将分化生成的芽转接到生根培养基中，诱导根分化，生成组培苗；所述生根培养基为1/2MS培养基+0.3mg/L IBA+0.3mg/L NAA+20g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH6.0；

(6)幼苗植株驯化：待组培苗长出7-8片叶片，株高为5-6cm时，放置在散射光下炼苗1-2天，移栽到黄心土和泥炭土混合基质中驯化培养。

2.如权利要求1所述的黄槿的组织培养方法，其特征在于，步骤(1)中，用自来水把外植体冲洗干净后，放入75％酒精中3-12s，无菌水冲洗3-5次，再用0.1％HgCl2浸泡消毒3-5min，再次用无菌水冲洗5-7次。

3.如权利要求1所述的黄槿的组织培养方法，其特征在于，步骤(2)中，愈伤组织诱导培养条件为：23-25℃暗培养3-5天，然后再于1500-2000Lux光照培养12h和黑暗培养12h交替进行，14-21天。

4.如权利要求1所述的黄槿的组织培养方法，其特征在于，步骤(3)中，诱导丛生芽分化的条件为：23-25℃，1500-3000Lux光照培养12h和黑暗培养12h交替进行，17-22天。

5.如权利要求1所述的黄槿的组织培养方法，其特征在于，步骤(4)中，丛生芽增殖培养的条件为：23-25℃，1500-3000Lux光照培养12h和黑暗培养12h交替进行，21-28天。

6.如权利要求1所述的黄槿的组织培养方法，其特征在于，步骤(5)中，诱导根生成的条件为：23-25℃，每天1500-3000Lux光照培养12h和黑暗培养12h交替进行，共培养23-34天。

7.如权利要求1所述的黄槿的组织培养方法，其特征在于，步骤(6)中，黄心土和泥炭土按照1:1混合制备成混合基质，用600倍多菌灵进行喷施拌土，用塑料膜密封、暴晒灭菌一周，将步骤(5)的组培苗移栽到混合基质上继续培养，及时喷水并覆盖塑料膜保湿，苗上方覆盖单层遮阳网，一周后移除，培养20-30天。

8.如权利要求7所述的黄槿的组织培养方法，其特征在于，控制温度为23-25℃，空气湿度50-60％，混合基质湿度80-85％。