[发明专利]一种米酵菌酸复合抗原、米酵菌酸抗体及其制备方法和酶联免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种米酵菌酸复合抗原、米酵菌酸抗体及其制备方法和酶联免疫试剂盒，该米酵菌酸复合抗原结构为：载体蛋白‑NH‑COO‑PEG6‑NH‑COO‑BA，其中，载体蛋白与氨基‑六聚乙二醇‑羧酸上的羧基偶联，然后氨基‑六聚乙二醇‑羧酸上的氨基与米酵菌酸上的羧基偶联。米酵菌酸复合抗原的制备方法为：采用氨基‑六聚乙二醇‑羧酸作为连接臂，将该连接臂、米酵菌酸与载体蛋白进行偶联，得到米酵菌酸复合抗原。可利用该米酵菌酸复合抗原制备单克隆抗体。所述米酵菌酸复合抗原的免疫原性更强，效价和检测灵敏度得到大幅度的提升，且制备的单克隆抗体的品质高，利用该单克隆抗体的米酵菌酸的酶联免疫试剂盒可被广泛用于样品中米酵菌酸的检测。

技术领域

本发明涉及食品毒素检测技术领域，尤其涉及一种米酵菌酸复合抗原、米 酵菌酸抗体及其制备方法和试剂盒。

背景技术

米酵菌酸(Bongkrekicacid，BA)是椰毒假单胞菌(pseudomonas cocovenenans)及其酵米面亚种(P.co-covenenanssubsp.farinoferm entans，简 称椰酵假单胞菌)在适宜条件下产生的有毒代谢物之一。米酵菌酸的化学结 构不同于一般细胞毒素的主要特点在于其化学本质不是大分子蛋白质，而是 多不饱和脂肪二酸衍生物，其分子式为C₂₈H₂₈0₇,分子量为486，结构式为：

食入该毒素污染的食物可引起人或动物中毒，重者可致死亡。米酵菌酸是 发酵玉米面制品、变质鲜银耳及其它变质淀粉类制品引起中毒的主要原因。 因此，对食品中的米酵菌酸的检测越来越受到重视。但是目前市面上暂未出 现高效的米酵菌酸抗体及相应的高效检测方法。

因此，现有技术有待进一步改进。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种米酵菌酸复合抗原、米酵菌酸抗体及其 制备方法和酶联免疫试剂盒，该米酵菌酸复合抗原的免疫原性强，该单克隆 抗体的效价高，对米酵菌酸的检测灵敏度高，可利用其制备米酵菌酸的检测 试剂盒，广泛用于米酵菌酸的检测。

为解决上述问题，本申请提供以下技术方案：

第一方面，本申请提供一种米酵菌酸复合抗原，其连接方式如下：载体蛋 白-NH-COO-PEG6-NH-COO-BA，载体蛋白与氨基-六聚乙二醇-羧酸上的羧基 偶联，然后氨基-六聚乙二醇-羧酸上的氨基与米酵菌酸上的羧基偶联。

采用聚乙二醇作为连接臂，可以保证米酵菌酸不受蛋白大分子的空间位阻 影响，从而更好的暴露米酵菌酸，产生免疫反应，从而显著提高抗原的免疫 原性。

第二方面，本申请提供一种上述米酵菌酸复合抗原的制备方法，该制备方 法为：采用氨基-六聚乙二醇-羧酸作为连接臂，将该连接臂、米酵菌酸与载体 蛋白进行偶联，得到米酵菌酸复合抗原。

优选地，所述米酵菌酸复合抗原的制备方法包括以下步骤：

连接臂的活化：取EDC、NHS和氨基-PEG6-羧酸混合，室温孵育，得到 混合物；优选地，EDC、NHS和氨基-PEG6-羧酸采用相同的物质的量；

连接臂与载体蛋白的连接：将上述混合物缓慢加入到载体蛋白溶液中，室 温孵育；通过超滤除去未结合的载体蛋白以及氨基-PEG6-羧酸，形成氨基 -PEG6-载体蛋白复合物。

米酵菌酸的活化：将EDC、NHS和米酵菌酸混合，室温孵育1h，得到活 化的米酵菌酸；优选地，EDC、NHS和米酵菌酸为相同物质的量；

米酵菌酸与载体蛋白的连接：将活化的米酵菌酸加入到前述制备得到的氨 基-PEG6-载体蛋白复合物中，室温孵育；超滤除去未结合的米酵菌酸后，最 终得到米酵菌酸复合抗原。