[发明专利]一种检测黄原胶的双抗体夹心ELISA方法

说明书

本发明涉及一种检测生物样本中黄原胶含量的双抗体夹心ELISA方法，属于免疫分析技术领域。本发明提供的一种生物样本中黄原胶含量的双抗体夹心ELISA检测方法，包括以下步骤：1)抗体包被；2)封闭；3)加样品；4)加酶标抗体；5)加显色液；6)加终止液；7)测定：用酶标仪测定波长450nm处的OD值；该方法具有较高的灵敏度，对黄原胶具有较好的特异性，定量准确，简单易用的特点，可用于生物样本中黄原胶含量的检测，具有实际应用价值，具有良好的推广性。

技术领域

本发明属于免疫分析技术领域，尤其涉及一种检测黄原胶的双抗体夹心ELISA方法。

背景技术

黄原胶(Xanthan gum,XG)是由野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)发酵制备的一种微生物胞外杂多糖，它是由D-葡萄糖、D-甘露糖和D-葡萄糖醛酸由2:2:1形成的重复的五糖单位。XG对各种酶有耐受性，在温度、pH和离子浓度范围内都非常稳定。并且XG在低浓度下具有高黏度和高假塑性，已广泛应用于医疗和制药领域。但是由于黄原胶结构复杂，既缺少生色基团，又缺乏光吸收基团，因此其在低浓度下检测存在非常大的困难，尤其是应用至体内，进行药物浓度检测的过程中，易受其他生物源成分干扰，致使建立有效的分析方法十分艰难。

如何建立稳定、高效的检测方法一直是困扰黄原胶体内外微量检测研究的主要问题，因此，建立一种专属型好、灵敏、快速、可靠的检测方法是非常必要的。

发明内容

本发明提供了一种检测样品中黄原胶的双抗体夹心ELISA方法，所述方法稳定性好、成本低、能同时检测大批量样本，为样品(尤其是，生物样品)中黄原胶的定性或定量检测提供了免疫学方法。

一方面，本发明提供了一种检测样品中黄原胶的双抗体夹心ELISA方法，所述方法包括如下步骤：

(1)利用抗黄原胶的3A7单抗作为包被抗体对酶标板进行包被；

(2)对酶标板进行封闭，之后，添加样品并孵育一段时间；

(3)添加酶标记的3A7单抗进行反应；

(4)显色后对酶标板进行检测。

本发明中，所述3A7单抗具有轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

在一个实施方式中，所述3A7单抗是鼠源抗体、人源抗体或嵌合抗体。

在优选的实施方式中，所述3A7单抗是小鼠抗体。

在一个实施方式中，所述3A7单抗还包括包含选自IgG1，IgG2，IgG3或IgG4的IgG的重链恒定区，优选，IgG2，例如，IgG2a。

本发明中，3A7单抗和3A7单克隆抗体的含义可以互换，均指代实施方式中得到的抗黄原胶的命名为3A7的单克隆抗体。

在一个实施方式中，所述黄原胶的相对分子质量为10万-1000万。

在一个实施方式中，所述样品选自食品、药物或生物样品；所述生物样品来源于人或动物的血浆、组织、关节滑液等。

在一个实施方式中，步骤(3)中所述酶标记的3A7单抗为辣根过氧化物酶(HRP)标记的3A7单抗。所述HRP标记抗体可以采用本领域公知的技术进行标记。

本发明所述检测样品中黄原胶的双抗体夹心ELISA方法可以是定性检测，也可以是定量检测。

在一个实施方式中，所述步骤(1)中，3A7单抗包被浓度为1μg/mL-100μg/mL，优选，5μg/mL-50μg/mL，更优选，10μg/mL。所述步骤(1)中包被抗体的温度为4℃-16℃，包被时间为12-24h。