[发明专利]一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法

权利要求书

1.一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、制备芍药外植体：

a、取芍药种子用纯水浸泡，然后用纱布覆盖，直至种子表面出现裂痕，形成萌发状态的种子，为A品；

b、取A品洗净后盖上纱布冲洗，冲洗后经两次消毒除菌，得无菌种子，为B品；

c、将B品转入萌发培养基进行培养，直至种子萌发出幼苗，切除幼苗根部及茎部，留下根部与茎部相连的茎段部分，得芍药外植体，为C品；

S2、诱导芍药愈伤组织：将C品置于诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，培养出新发的愈伤组织，为D品；

诱导培养基采用1/2MS培养基，1/2MS培养基中添加含量分别为6-9mmol/L 的Ca²⁺、1-3mg/L的6-BA、0.2-0.6mg/L的NAA、0.1-0.3mg/L的2,4-D 和0.05-0.2mg/L的褪黑素；

S3、培养继代芍药愈伤组织：将D品转入继代培养基中进行放大培养，并按期继代培养，培养出长大的愈伤组织，为E品；

继代培养基采用1/2MS培养基，1/2MS培养基中添加含量分别为0.2-0.8mg/L的NAA、0.2-0.8mg/L的TDZ、0.05-0.2mg/L的2,4-D和0.05-0.2mg/L的褪黑素；

S4、制备提取物：将E品制成芍药愈伤组织提取物，为成品。

2.根据权利要求1所述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤S1的a步骤中，纯水的加入量为浸没至种子高度的一半。

3.根据权利要求1所述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤S1的a步骤中，纯水的温度为35-45℃。

4.根据权利要求1所述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤S1的b步骤中，第一次消毒为，采用浓度为2-10%的NaClO溶液充分浸泡，然后于多功能旋转摇床上旋转震荡消毒20-40min进行消毒除菌，并用无菌水洗净。

5.根据权利要求1所述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤S1的b步骤中，第二次消毒为，采用浓度为70-80%的酒精浸泡消毒除菌，浸泡时间为5-10s，浸泡后用无菌水洗净。

6.根据权利要求1所述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤S1的c步骤中，萌发培养基采用MS培养基，MS培养基中添加含量为20-40g/L的蔗糖。

7.根据权利要求1所述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤S4制备提取物具体为，将E品经常规方法制成芍药愈伤组织提取物，或者将E品冻干粉碎后，经丁二醇回流提取得到芍药愈伤组织提取物。