[发明专利]一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法

说明书

本发明公开了一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，包括以下步骤：S1、制备芍药外植体：a、取芍药种子用水浸泡，然后用纱布覆盖，至种子表面出现裂痕，得A品；b、取A品洗净后盖上纱布冲洗，冲洗后经两次消毒除菌，得B品；c、将B品转入萌发培养基进行培养，直至种子萌发出幼苗，得C品；S2、诱导芍药愈伤组织：将C品置于诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，得D品；S3、培养继代芍药愈伤组织：将D品转入继代培养基中进行放大培养，并按期继代培养，得E品；S4、制备提取物：将E品制成芍药愈伤组织提取物，为成品。本发明具有诱导率高、褐化及玻璃化率低、活性物质含量高的特点。

技术领域

本发明涉及一种提取物的制备方法，特别是一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法。

背景技术

芍药(Paeonia lactiflora Pall.)是毛茛科、芍药属的多年生草本植物。其提取物中含有丰富的芍药苷、牡丹酚、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷等成分，其中，芍药苷具有最高的含量。芍药苷具有优秀的美白、保湿、抗氧化活性，同时还具有抗炎、抗衰老、抗过敏、维持皮肤健康等功效，非常适合作为化妆品原料进行研究。目前，芍药苷主要的生产手段为提取晒干炮制的生长2～4年的芍药根，再进行分离得到芍药苷。传统的芍药生产方法多为分株繁殖。使用分株法生产的芍药生长周期多为2～4年，使用此种方法生产芍药具有生长周期长、产量与质量不稳定、受气候条件制约较大、生态环境恶化等诸多不利因素。

愈伤组织(callus)是指原植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。愈伤组织细胞具有全能性，可分化为任一植物器官，其分裂速度快，次生代谢产物含量高，且植物愈伤组织培养不受气候等外界条件影响，因此以植物的叶片、茎段等作为外植体诱导产生愈伤组织，进行组织培养，来提取芍药苷，具有组织培养速度快、不受环境条件限制等优点，因而可大面积推广。

然而目前使用传统的植物愈伤组织培养法生产芍药愈伤组织，容易受到外界环境的干扰、细菌的污染，而影响其存活率，导致芍药愈伤组织诱导分化率与产量较低、愈伤组织易褐化的弊端，从而导致提取到的活性物质含量较低的问题。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法。本发明具有诱导率高、褐化及玻璃化率低、活性物质含量高的特点。

本发明的技术方案：一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法，包括以下步骤：

S1、制备芍药外植体：

a、取芍药种子用纯水浸泡，然后用纱布覆盖，直至种子表面出现裂痕，形成萌发状态的种子，为A品；

b、取A品洗净后盖上纱布冲洗，冲洗后经两次消毒除菌，得无菌种子，为B品；

c、将B品转入萌发培养基进行培养，直至种子萌发出幼苗，切除幼苗根部及茎部，得芍药外植体，为C品；

S2、诱导芍药愈伤组织：将C品置于诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，培养出新发的愈伤组织，为D品；

S3、培养继代芍药愈伤组织：将D品转入继代培养基中进行放大培养，并按期继代培养，培养出长大的愈伤组织，为E品；

S4、制备提取物：将E品制成芍药愈伤组织提取物，为成品。

前述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法中，所述步骤S1的a步骤中，纯水的加入量为浸没至种子高度的一半。

前述的一种芍药苷含量高的芍药愈伤组织提取物的制备方法中，所述步骤S1的a步骤中，纯水的温度为35-45℃。