[发明专利]基于卵泡液蛋白表达作为不明原因复发性流产的预警方法

说明书

本发明属于生殖医学领域。技术方案是：本发明提供的技术方案是：一种基于卵泡液HRG、C4B蛋白表达水平作为不明原因复发性流产的预警方法，所述方法非用于疾病诊断治疗；包括如下步骤：1)卵泡液的收集、保存：对收集到的卵泡液在恒温下进行卵冠丘复合物的拾取后将剩余的卵泡液收集，进行1500rpm离心取上清、分装，冻存于‑80℃；2)C4B、HRG卵泡液蛋白浓度ELISA测定：采用相应蛋白的ELISA检测试剂盒，对卵泡液进行相应蛋白浓度的检测；3)结果统计及分析。该种方法应能对URSA患者的妊娠结局有一定的预测价值。

技术领域

本发明属于生殖医学领域，具体是一种不明原因复发性流产患者的预警方法。

背景技术

在育龄期夫妇中，单次妊娠发生流产的几率大约为15-25％，并且大多数流产发生于妊娠早期。约有2-5％的育龄期夫妇会经历2次及以上的流产。通常将3次或3次以上在妊娠28周之前的胎儿丢失称为复发性流产，复发性流产的病因复杂，孕早期复发性流产的常见病因包括遗传因素，解剖结构异常，感染因素，自身免疫疾病、内分泌异常、血栓前状态及环境因素等等。尽管如此，约有一半以上的RSA病例无法得到确切的病因学诊断，被称为不明原因的复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)，由于病因未明，此类病人的个体化治疗及预防流产的再发是目前妇产科学和生殖医学临床工作中的重大难题。

研究统计显示，再次妊娠发生的流产的风险随着既往流产的次数而增加：初次妊娠的孕妇流产率为11％，而3次及3次以上流产史的妇女，其再次妊娠流产的发生率升高至40％。因此，我国专家建议，连续发生2次流产，其再次出现流产的风险与3次者相近，即应重视并予评估。然而，目前关于不明原因复发性流产的发病机制研究尚不明确，缺乏特异性的治疗手段，并且临床工作中关于复发性流产的再发风险的预判尚缺乏有效的分子标记物及评估体系，因此，研究建立流产发生的预警机制对于RSA患者的处理十分重要。

随着近年来各类高通量组学技术的发展，蛋白组学、代谢组学等技术在URSA发病机制的探索及分子标记物的寻找中发挥着重要的作用。已有文献报道利用蛋白组学、RNA-seq及生物信息学分析等技术检测复发性流产患者流产绒毛、蜕膜及子宫内膜组织的蛋白组学改变；但绒毛、蜕膜及子宫内膜组织成分复杂，且大样本的取材收集及验证的困难较大，难以用于临床上对于再妊娠风险的评估。另一方面，血清等体液是作为分子标记物检测的常用样本，近年来已有研究报道，利用iTRAQ蛋白组学和PRM技术及(1)H NMR技术对URSA患者的血清样本进行了蛋白组学、代谢组学的研究，发现了一系列潜在分子标志物。然而，由于女性生殖相关的激素、蛋白等关键因子受月经周期影响较大，血清样本的取样时间难以较好统一，并且其受全身其它系统的影响较大，为后续大样本的验证带来了困难。

发明内容

本发明的目的是克服上述背景技术的不足，基于前期不明原因复发性流产患者行IVF的卵泡液蛋白组学研究，及后期扩大样本验证，提供一种基于卵泡液HRG、C4B蛋白表达水平作为不明原因复发性流产的预警方法，该种方法应能对URSA患者的妊娠结局有一定的预测价值。

本发明提供的技术方案是：

一种基于卵泡液HRG、C4B蛋白表达水平作为不明原因复发性流产的预警方法，所述方法非用于疾病诊断治疗；包括如下步骤：

1)卵泡液的收集、保存

对收集到的卵泡液在恒温下进行卵冠丘复合物的拾取后将剩余的卵泡液收集，进行1500rpm离心取上清、分装，冻存于-80℃；

2)C4B、HRG卵泡液蛋白浓度ELISA测定

采用相应蛋白的ELISA检测试剂盒，对卵泡液进行相应蛋白浓度的检测；

3)结果统计及分析