[发明专利]MTHFR基因SNP位点的应用及其检测引物和试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及MTHFR基因SNP位点的应用及其检测引物和试剂盒。本发明研究发现MTHFR的基因多态性位点rs1801133的基因型与胸主动脉夹层致病风险具有显著关联，MTHFR基因SNP位点rs1801133的基因型为TT或CT的人群，较基因型为CC的人群胸主动脉夹层的致病风险高。实验表明，与正常人相比，患者rs1801133位点的基因型为TT或CT的比例显著提高(P0.01)，因此，rs1801133位点可作为高血压敏感的胸主动脉夹层的分子诊断和预警标志物。结合血清中同型半胱氨酸的含量(基线15μmol/L)可对胸主动脉夹层进行更为准确的评估和诊断。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及MTHFR基因SNP位点的应用及其检测引物和试剂盒。

背景技术

胸主动脉夹层血管外科的常见疾病，指主动脉内血液通过破裂的内膜进入到血管中膜，逐渐沿着血管长轴方向进展，形成血管内外真假两个腔隙，俗称主动脉夹层。临床主要表现为急性发作的剧烈性胸部疼痛，呈刀割样或者撕裂样的感觉难以忍。该病是致死率极高的心血管重症，其发病急、治疗棘手、预后差，极大地增加了我国公共卫生的负担。

高血压作为胸主动脉夹层的独立风险因素，极大地增加了患病风险。中老年人为好发人群，高峰年龄是50～70岁，男女比例约2～3:1。65％～70％在急性期死于心脏压塞、心律失常等，因此，降低胸主动脉夹层死亡率的关键在于早期干预和风险预警。然而，目前临床上尚未有明确的适用于胸主动脉夹层的分子标志物。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了MTHFR基因SNP位点的应用及其检测引物和试剂盒。本发明提供的检测引物和试剂盒适用于MTHFR基因SNP位点rs1801133的检测，灵敏性高、特异性强。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了MTHFR基因SNP位点rs1801133的试剂在制备评估胸主动脉夹层致病风险的试剂盒中的应用。

其中，所述胸主动脉夹层为高血压敏感的胸主动脉夹层。

本发明通过全基因组重测序和全外显子测序发现，胸主动脉夹层患者中亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)存在典型的基因多态性(ENST00000376583:p.Ala263Val/c.788CT)，并且与患者血清中的同型半胱氨酸含量具有高度一致性。具体表现为：患者rs1801133位点的基因型(TT或CT)，其血清中同型半胱氨酸的含量严重超标；而rs1801133位点的基因型(CC)，其同型半胱氨酸含量基本保持正常。研究表明，MTHFR的基因多态性位点rs1801133的基因型与胸主动脉夹层致病风险具有显著关联。MTHFR基因SNP位点rs1801133的基因型为TT或CT的人群，较基因型为CC的人群胸主动脉夹层的致病风险高。

本发明还提供了检测MTHFR基因SNP位点rs1801133的引物对，包括核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示的下游引物。

本发明还提供一种评估胸主动脉夹层致病风险的试剂盒，包括SEQ IDNO:1～2所示的引物对。

本发明提供的试剂盒还包括PCR扩增试剂。

进一步的，所述PCR扩增试剂包括PCRMasterMix和PCR-gradewater。

本发明提供的试剂盒还包括酶切试剂。

进一步的，所述酶切试剂包括T7EndonucleaseI核酸酶、NEBBuffer2和PCR-gradewater。

本发明还提供一种检测MTHFR基因SNP位点rs1801133基因型的方法，包括以下步骤：

步骤1：以待测样本的DNA为模板，以权利要求4所述的引物对进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；