[发明专利]NMN的制备方法及含NMN的犬猫抗衰老保健品配方

说明书

本发明公开了一种NMN的制备方法及含NMN的犬猫抗衰老保健品配方。NMN(β‑烟酰胺单核苷酸)采用含NMN短双岐杆菌生物酶催化法制备，得到纯度99.97%的β‑NMN。一种含NMN的犬猫抗衰老保健品配方，包括60‑85份鱼油、1‑10份β‑NMN、0.05‑0.2份白藜芦醇、5‑20份牛磺酸和1‑15份卵磷脂。本发明能有效修复DNA损伤，延缓犬猫衰老，提高生命活力，增强能量代谢，缓解疲劳，对心脑血管疾病、经退行性病及老化退行性疾病等也具有较好的预防和修复作用。

技术领域

本发明属于犬猫抗衰老保健品技术领域，特别是涉及NMN的制备方法及含NMN的犬猫抗衰老保健品配方。

背景技术

近现代以来，随着宠物食品质量的提升，宠物营养水平也随之提高，同时医疗水平也不断提升，使宠物年龄更加延长，近60年数据统计发现，宠物的平均年龄翻了2倍。进入21世纪以来，宠物保健品的科研资源投入不断增加，市面上出现各式各样的宠物保健产品，其中关于延长宠物寿命的保健较为热门。

随着宠物年龄的增长，例如宠物犬猫步入中年以后体内NAD+（中文名烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，简称为辅酶Ⅰ）水平不断下降，导致线粒体的活性衰退，即出现衰老现象。改善犬猫体内NAD+活性能够有效地增强线粒体的功能，从来缓解衰老，所以补充NAD+是抗衰老的关键之一。补充NAD+的方式主要是补充NAD+的前体物质，目前研究报道发现NAD+有四种前体物质，NMN(β-烟酰胺单核苷酸)与其它的NAD+前体如烟酰胺核糖(NR)、烟酸(NA)和烟酰胺(NAM)在结构上相似，均含有吡啶环结构；但烟酸(NA)和烟酰胺(NAM)在应用方面存在一些缺点，如烟酰胺会引起恶心呕吐以及过敏的风险，而高剂量服用烟酰胺会引起肝脏毒性，四种NAD+前体物质中，NMN是补充效率最高的NAD+前体物质，NMN会被机体高效代谢，不会引起任何明显的有害影响。目前中国市场上NMN产品主要是人用级别的，在宠物市场上，还没有一款含NMN的抗衰老犬猫保健品。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种NMN的制备方法及含NMN的犬猫抗衰老保健品配方。

一种NMN的制备方法，步骤如下：

1）微生物培养

含NMN短双岐杆菌培养基条件为：MRS培养，进行催化NMN的表达；所述的MRS含1%蛋白胨，2%葡萄糖，0.1%吐温80，0.2%K₂HPO₄，0.5%乙酸钠，0.2% 氢二铵，0.02%MgSO₄·7H₂O，0.005% MnSO₄·4H₂O，0.1%微量金属溶解液和0.0076%的尿嘧啶，外源添加催化酶烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyltransferase）；

2）NMN培养滤液获取

含NMN的短双岐杆菌用转速2200g进行离心，分别收集每管细胞的上清液，将细胞进重悬浮，再利用超声细胞破碎器在冰浴上进行超声裂解，每次30秒，循环3次，超声进一步裂解之后再行超滤最终得到NMN料液；

3）NMN料液萃取

将含NMN料液与相同体积的质量百分比浓度4% 的NaHCO₃混合，用于Bond ElutPBA树脂固相萃取；萃取液用3ml 2%的NaHCO₃洗涤后，再用3ml 2%的甲酸进行洗脱，得到β-NMN萃取液；

4）NMN原料制备

用离子交换法进行对NMN萃取液进行除盐处理，然后用醇提水沉法进行脱色处理，脱完色后用蒸发溶剂法进行NMN液体的结晶，结晶样品加水溶解，用转速2200g进行离心过滤，最后对样品进行干燥后得到NMN原料。

所述的短双歧杆菌的编号为bifidobacterium breve K，双歧杆菌属，先准备短双岐杆菌感受态细胞，然后导入含有NMN活性序列的质粒到感受态的短双岐杆菌得到NMN短双岐杆菌。