[发明专利]检测HLA-A基因SNP标记rs1136697-G的PCR扩增引物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202111112575.9 | 申请日： | 2021-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN113755593A | 公开（公告）日： | 2021-12-07 |
| 发明（设计）人： | 田伟;李立新;程文 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 长沙朕扬知识产权代理事务所(普通合伙) 43213 | 代理人： | 郭蓓霏 |
| 地址： | 410083 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 hla 基因 snp 标记 rs1136697 pcr 扩增 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种检测HLA-A基因SNP标记rs1136697-G的PCR扩增引物，其特征在于，包括上游引物rs113-SF2和下游rs113-REV1，其碱基序列如下：
rs113-SF2：5’-CACACCgTCCAgAggATgAg-3’；
rs113-REV1：5’-TgCgCTgCAgCgTCTCCTT-3’。
2.一种试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1所述的PCR扩增引物。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，包含：1.3pmole上游引物rs113-SF2、1.3pmole下游引物rs113-REV1、5μL 2×Taq MastMix和ddH2O。
4.一种检测HLA-A基因SNP标记rs1136697-G的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取样本DNA；
(2)利用权利要求1所述的PCR扩增引物，对所述步骤(1)得到的样本DNA进行PCR扩增；
(3)将所述步骤(2)得到的PCR扩增产物进行琼脂糖电泳，读取电泳结果；若同时出现268bp和360bp的条带，则鉴定为rs1136697-G阳性样本；若仅出现360bp的条带，则鉴定为rs1136697-G阴性样本。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系含：2×TaqMastMix5μL、上游引物rs113-SF2 1.3pmole、下游引物rs113-REV1 1.3pmole、基因组DNA50ng，用灭菌ddH2O补足反应体系至10μL。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应参数条件为：预变性95℃，2min；95℃变性30s，63℃退火50s，72℃延伸30s，循环35次，再72℃延伸5min。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述琼脂糖电泳的参数条件为：采用2％琼脂糖电泳，200V，电泳15min。
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