[发明专利]一种同时检测添加剂、L-肉碱和D-肉碱的方法

说明书

本发明涉及一种同时检测添加剂、L‑肉碱和D‑肉碱的方法，所述方法包括以下步骤：制备标准试剂，并采用高效液相色谱仪按照以下色谱条件进行检测分析，建立回归方程；所述标准试剂包括左卡尼汀标准溶液和L‑肉碱标准溶液；所述色谱条件如下：色谱柱为手性色谱柱；流动相为乙腈‑高氯酸钠溶液，柱温25摄氏度，流速0.5mL/min；样品前处理及检测：称取饲料添加剂样品或预混料，加入超纯水超声提取5‑30min，取出冷却至室温，用超纯水定容至刻度，经0.22µm水相滤膜过滤，上机检测；将检测得到的结果带入回归方程，计算得到添加剂浓度。本发明检测方法L‑肉碱检测分析效率更高，可以做到15min完成整个检测，提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及色谱检测方法，特别是一种高效液相色谱检测方法，能够实现包括L-肉碱和D-肉碱等多种添加剂的同时检测分析，属于光电分析技术领域。

背景技术

左旋肉碱，又称左卡尼汀，是一种促使脂肪转化的类氨基酸，在生物体的脂肪代谢过程中起着重要作用。国内为研究表明，猪饲料中添加左旋肉碱能够提高仔猪抗应激能力，提高育肥猪的胴体品质，提高母猪的繁殖性能；水产饲料中添加左旋肉碱能够提高水生动物的生长性能；肉鸡饲料中添加左旋肉碱能够降低肉鸡腹水的发生率，改善肉鸡出壳时间和受精蛋孵化率。

近年来左旋肉碱越来越多地应用于动物饲料中，对于饲料企业来说，饲料添加剂左旋肉碱含量的精准测定不仅有利于精准营养配方，还能节约生产成本，意义重大。

国内外有关食品中左旋肉碱的检测方法较多，研究样品多数为血浆、乳制品、尿液、食品、保健品、减肥产品等。采用的仪器设备主要有：离子色谱法、分光光度法、液相色谱法以及液相色谱－串联质谱法等，每种方法都有各自的优缺点。

赵淑娟，建立了乳粉中左旋肉碱含量的液相色-谱串联质谱测定法。样品采用20％甲酸水-乙腈提取，通过正交试验优化皂化条件：15％氢氧化钾溶液按5:1在60℃条件下皂化20min。

李秀英、黄嘉乐、邱志超等，在“微波水解/超高效液相色谱-串联质谱法快速测定乳粉中的胆碱和左旋肉碱”，《食品安全质量检测学报》2016，利用微波消解技术对乳粉样品进行水解，释放出结合态的胆碱和左旋肉碱。通过微波技术辅助水解，缩短了样品处理的时间，适用于乳粉中的胆碱和左旋肉碱的检测。

徐敦明,陈燕,张缙等，“Determination of L-Carnitine in Dairy Products byHigh Performance Liquid Chromatography-Electrospray Ionization Tandem MassSpectrometry”，《分析测试学报》。在该论文公开的方法中，建立了高效液相色谱-串联质谱内标法测定乳品中左旋肉碱含量的方法，样品经0.1mol/L HC1溶解，采用乙腈溶液沉淀蛋白，以HILIC色谱柱分离待测物，采用鞘流电喷雾离子化，正离子多反应监测模式(MRM)检测，内标法定量。

宋周虎、周璐意、胡晓敏人等在“离子对色谱法测定保健食品中左旋肉碱的含量”《今日药学》中，建立了一种离子色谱法检测减肥类保健食品中左旋肉碱含量，采用ODS柱进行分离，以40mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液-乙腈(95∶5)为流动相，流速：0.8mL/min，检测波长：220nm，定量管进样20μL，该方法简便、快速，可用于含左旋肉碱保健食品的含量检测。

马瑞欣、李同庆、张志华在论文“渔用配合饲料中左旋肉碱含量的测定”，《河北渔业》中，针对饲料检测建立了高效液相色谱-串联质谱法检测渔用饲料中左旋肉碱的含量，该方法采用超纯水对样品进行提取，经亲水作用色谱柱(HILIC)分离后采用三重四级杆进行定量分析。该方法存在基质效应，基质抑制率分别为鳖料19.7％，鲫鱼料17.9％，锦鲤料3.37％。

关于饲料添加剂左旋肉碱的检测方法，目前采用的是农业行业标准NY/T1028-2006《饲料添加剂左旋肉碱》。该含量测定方法以冰乙酸为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸标准溶液滴定其中的碱性氮来推算。