[发明专利]单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体及免疫磁珠和用途

权利要求书

1.单核细胞增生李斯特菌P60蛋白杂交瘤细胞株12A5H5F8，其特征在于，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23021。

2.一种单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体，其特征在于，是由保藏编号为CGMCCNo.23021的单核细胞增生李斯特菌P60蛋白杂交瘤细胞株12A5H5F8产生的。

3.权利要求2所述的单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体的用途，其特征在于，它被用于检测单核细胞增生李斯特菌，所述用途用于非疾病诊断目的。

4.一种单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体免疫磁珠，其特征在于，由纳米磁珠和权利要求2所述的单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体通过偶联得到。

5.一种单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体免疫磁珠的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

b1：将权利要求2所述的P60单克隆抗体与活化的纳米磁珠进行混合，接着加入pH＝6的MES缓冲液进行混合，然后置于旋转混合器上室温反应1h，接着置于磁力架上进行磁分离并移除上清；

b2:向步骤b1中磁分离得到的下层物料中加入含牛血清白蛋白的硼酸盐吐温溶液并且重悬磁珠，置于混匀仪上于37℃封闭；然后置于磁力架上磁分离并移除上清，接着用PBS缓冲液进行洗涤。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述活化的过程包括如下步骤：

a1：采用一水吗啉乙磺酸吐温溶液对纳米磁珠进行洗涤，然后置于磁力架进行磁分离后吸出上清；

a2：用一水吗啉乙磺酸溶液分别配制碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶液。然后向步骤a1中洗涤后的纳米磁珠中加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶液，并在室温下搅拌；然后将混合物置于磁力架上磁分离移除上清，并加入一水吗啉乙磺酸溶液进行洗涤，然后置于磁力架磁分离，得到活化的纳米磁珠。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤a1中，所述纳米磁珠的粒径为201.1-340.9nm。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤b1中，P60单克隆抗体的浓度为2.5-3.5mg/mL。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤b1中，所述活化的纳米磁珠与P60单克隆抗体的重量比为1:0.008-0.01。

10.一种用于检测单核细胞增生李斯特菌的免疫磁珠试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有权利要求4所述的单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体免疫磁珠或由权利要求5-9中任意一项所述的方法制备的单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体免疫磁珠。