[发明专利]单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体及免疫磁珠和用途

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体及免疫磁珠和用途。单核细胞增生李斯特菌P60蛋白杂交瘤细胞株12A5H5F8，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.23021，产生的单克隆抗体和纳米磁珠偶联得到了单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体免疫磁珠。单核细胞增生李斯特菌P60蛋白杂交瘤细胞株12A5H5F8，可以产生可以特异性识别LM分泌的P60蛋白的单克隆抗体，由该单克隆抗体制备的免疫磁珠可以特异性的捕获LM，而且对食品和环境中痕量细菌有很高的灵敏性，具有特异性好、灵敏度高、稳定性好等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及单核细胞增生李斯特菌P60单克隆抗体及免疫磁珠和用途。

背景技术

食品安全与人们的日常生活以及身体健康息息相关，近年来随着人们生活水平的提高，进口冷冻冷藏生肉、冰鲜水产品、乳粉等越来越多，但质监部门不断从这些产品中检测出多种致病微生物，例如从虾蟹贝类中检出相对较高的副溶血性弧菌，检出率高达26.92％，从13.35％的猪肉和7.87％的鱼类中检测出单增李斯特菌，这些都提醒我们发展食源性致病菌快速检测技术刻不容缓。

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是危害最大的食源性致病菌之一，占人类李斯特菌病的95％以上。LM是一种机会性病原菌，能迅速感染并扩散到宿主血液系统，导致脑膜炎、败血症或流产等严重疾病，在免疫功能低下人群、老年人、儿童和孕妇等高危人群中尤其危险，而食用受污染的食品(乳制品，生肉和蔬菜)仍然是造成感染的主要原因。鉴定活菌细胞和评估食品微生物质量的“金标准”是平板计数法，这种方法分析时间长，无法满足当前食品行业对快速和高通量技术的需求。现在，基于分子生物学的PCR技术，免疫学的ELISA方法等已成为快速检测的替代方法。另外，病原菌的全基因组测序(WGS)也已成为调查食源性疾病暴发的重要工具，一些国家已将WGS纳入国家食品控制系统。

免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic separation，IMS)是利用抗原抗体特异性结合的特点，以磁性微球为载体偶联抗体，抗原抗体反应后，在定向磁场的作用下快速分离并富集抗原的技术。IMS可以提升上游目的抗原(如致病菌、细胞因子等)的浓度，降低原有检测方法的检测限，提高检测方法的灵敏度，可以与传统平板计数、免疫检测、生化技术等结合，是食品中LM检测的有效辅助手段。IMS开发的重点是区分样品中LM和其它病原菌或者非致病性李斯特菌，提高LM富集的敏感性和选择性。为了实现更特异的检测，与细菌致病性相关的主要毒力因子：李斯特菌溶血素O(LLO)和P60蛋白，是首选的LM检测靶标。P60蛋白是LM细胞表面特异性的蛋白，在宿主入侵、细胞分裂和繁殖中起着重要作用，除此之外，P60蛋白还可以大量分泌到生长介质中。这些特性使P60成为开发免疫检测系统的理想靶点。

关于LM中P60蛋白及其抗体的应用包括：ELISA和免疫荧光，例如CN104178458A、CN105527441A、DE4318450A1、JP2006104154A、US2006078951A1、KR100504132B1、KR1020040088597A、US5932415A；胶体金试纸条，例如CN103911347 A、CN202710560 U、CN201548546 U、CN101609095A、CN101561436A、CN106093410A、EP0576842A2、JPH06233699A；基于生物素化P60蛋白单抗的A-BELISA检测和定量方法，例如CN104099299A；疫苗制备，例如CN101698100A、CA2817495A1、EP1708741B1、KR20090092803A、US9605251B2；癌症治疗，例如CN110913911A、WO2011060093 A3；重组核酸分子和表达试剂盒，例如CN1921884A、JP2007518405A、JP2007518405A、US20090081725A1；RNA药物组合物，例如CN108778308A、EP3319622A1、US20100172976 A1。