[发明专利]一种在猪上诱导高效表达外源基因的方法在审
| 申请号： | 202111116983.1 | 申请日： | 2021-09-23 |
| 公开（公告）号： | CN113817773A | 公开（公告）日： | 2021-12-21 |
| 发明（设计）人： | 赖良学;王可品;金琴 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院;生物岛实验室;三亚猪种质资源创新研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C12N15/65 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 边人洲 |
| 地址： | 510530 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 诱导 高效 表达 基因 方法 | ||
1.一种在猪上诱导高效表达外源基因的方法，其特征在于，所述方法包括在猪基因组内的开放性位点Rosa26和安全性位点Hipp11进行基因修饰；
所述基因修饰包括将rtTA表达盒敲入Rosa26位点，将TRE3G启动的报告基因表达盒敲入Hipp11位点。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述报告基因表达盒中的报告基因两侧具有被phiC31重组酶特异性识别的attP位点。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述rtTA表达盒敲入Rosa26位点的第一个内含子。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述rtTA表达盒具有新霉素抗性；
优选地，所述rtTA表达盒的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述报告基因表达盒具有嘌呤霉素抗性；
优选地，所述报告基因表达盒的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述报告基因表达盒中的报告基因替换为目的基因的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将所述报告基因表达盒中的报告基因替换为目的基因的步骤包括：
利用phiC31重组酶介导的位点特异性重组反应以及基因盒式置换方法将所述报告基因表达盒中的报告基因替换为目的基因。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述目的基因包括KRASG12D和/或CTLA4Ig-T2A-PDL1。
9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述报告基因表达盒中的报告基因包括tdTomato；
优选地，所述tdTomato的核酸序列包括SEQ ID NO.3所示的序列。
10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
将具有新霉素抗性的rtTA表达盒敲入猪基因组内的Rosa26位点的第一个内含子，将具有嘌呤霉素抗性的TRE3G启动的报告基因表达盒敲入猪基因组内的Hipp11位点。
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