[发明专利]一种基因表达盒、重组表达载体及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 202111121553.9 | 申请日： | 2021-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN113817766A | 公开（公告）日： | 2021-12-21 |
| 发明（设计）人： | 段玉玺;杨若巍;范海燕;陈立杰;王惠;朱晓峰;王媛媛;玄元虎;刘晓宇 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/113;C12N15/65;A01H5/06;A01H6/54 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 110866 辽宁省沈*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 表达 重组 载体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种基因表达盒，其特征在于，所述基因表达盒包括依次连接的启动子、egfp阅读框、2A肽的编码序列和多位点人工接头序列。
2.根据权利要求1所述的基因表达盒，其特征在于，所述2A肽为F2A肽、T2A肽、P2A肽和E2A肽中的一种；所述多位点人工接头序列的核苷酸序列如SEQ NO：1所示。
3.根据权利要求1或2所述的基因表达盒，其特征在于，所述启动子为Gmubi或GmubiXL。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的基因表达盒和初始载体。
5.根据权利要求4所的重组表达载体，其特征在于，所述初始载体为pCAMBIA1303、pBI121或pPZP100。
6.权利要求5所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)当初始载体为pCAMBIA1303时，在初始载体的CaMV poly(A)signal和NOS终止子之间插入启动子，得到Vector-P；
(2)在步骤(1)得到的Vector-P的启动子和NOS终止子之间插入egfp阅读框，得到Vector-P-E；
(3)在步骤(2)得到的Vector-P-E的egfp阅读框和NOS终止子之间插入2A肽的编码序列，得到Vector-P-E-2A；
(4)在步骤(3)得到的Vector-P-E-2A的2A肽编码序列和NOS终止子之间插入多位点人工接头序列获得重组表达载体Vector-P-E-2A-MCS。
7.权利要求5所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)当初始载体为pBI121时，在初始载体的RB T-DNA repeat和NOS终止子之间插入启动子，得到Vector-P；
(2)在步骤(1)得到的Vector-P的启动子和NOS终止子之间插入egfp阅读框，得到Vector-P-E；
(3)在步骤(2)得到的Vector-P-E的egfp阅读框和NOS终止子之间插入2A肽的编码序列，得到Vector-P-E-2A；
(4)在步骤(3)得到的Vector-P-E-2A的2A肽编码序列和NOS终止子之间插入多位点人工接头序列获得重组表达载体Vector-P-E-2A-MCS。
8.权利要求5所述重组表达载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)当初始载体为pPZP100时，在初始载体的MCS中插入NOS终止子，然后在NOS终止子和LB T-DNA repeat之间插入启动子，得到Vector-P；
(2)在步骤(1)得到的Vector-P的启动子和NOS终止子之间插入egfp阅读框，得到Vector-P-E；
(3)在步骤(2)得到的Vector-P-E的egfp阅读框和NOS终止子之间插入2A肽的编码序列，得到Vector-P-E-2A；
(4)在步骤(3)得到的Vector-P-E-2A的2A肽编码序列和NOS终止子之间插入多位点人工接头序列获得重组表达载体Vector-P-E-2A-MCS。
9.一种宿主，其特征在于，转化或转染有权利要求4或5所述的重组表达载体。
10.权利要求1～3任一项所述的基因表达盒、权利要求4或5所述的重组表达载体、权利要求9所述的宿主在制备转基因植物中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于沈阳农业大学，未经沈阳农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202111121553.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
