[发明专利]产缬氨酸的重组微生物及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种重组微生物，其特征在于，所述重组微生物与出发菌株相比，所述重组微生物中基因brnFE的启动子突变为如SEQ ID NO.1所示的DNA分子，和/或，所述重组微生物中基因brnQ编码的内运蛋白产生突变形成突变体，所述突变体含有以出发菌株野生型基因brnQ编码的内运蛋白的氨基酸序列为参考序列，第112位的丙氨酸被苏氨酸或丝氨酸或酪氨酸取代的突变。

2.根据权利要求1所述的重组微生物，其特征在于，所述突变体具有如SEQ ID NO.2-4中任一所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的重组微生物，其特征在于，所述出发菌株为棒杆菌属细菌或短杆菌属细菌；

优选地，所述棒杆菌属细菌为谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)或北京棒杆菌(Corynebacterium pekinense)；所述短杆菌属细菌为黄色短杆菌(Breviabacteriumflavum)；

更优选地，所述出发菌株为能够积累缬氨酸的棒杆菌属细菌。

4.一种蛋白突变体，其特征在于，其为基因brnQ编码的内运蛋白突变体，具体氨基酸序列如权利要求1-3中任一项所述。

5.编码权利要求4所述的蛋白突变体的核酸，优选，具有如SEQ ID NO.5-7中任一所示的核苷酸序列。

6.一种DNA分子，其特征在于，其为基因brnFE的启动子突变体，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

7.含有权利要求5所述的核酸和/或权利要求6所述的DNA分子的生物材料，所述生物材料为表达盒、载体或宿主细胞。

8.权利要求1-3中任一项所述的重组微生物或权利要求4所述的蛋白突变体或权利要求5所述的核酸或权利要求6所述的DNA分子或权利要求7所述的生物材料在提高微生物支链氨基酸产量中的应用，所述支链氨基酸为缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸，优选为缬氨酸。

9.权利要求1-3任一项所述的重组微生物的构建方法，其特征在于，包括：将出发菌株中基因brnFE的启动子突变为如SEQ ID NO.1所示的DNA分子，和/或，将出发菌株中基因brnQ突变为编码权利要求4所述的蛋白突变体的基因。

10.一种生产缬氨酸的方法，其特征在于，包括将权利要求1-3任一项所述的重组微生物接种于种子培养基进行种子培养，然后将种子培养物转入发酵培养基进行发酵培养的步骤；

优选地，所述种子培养基包括如下组分：豆粕抽提物10-20g/L，葡萄糖15-25g/L，硫酸铵6-8g/L，硫酸镁0.4-0.6g/L，磷酸二氢钾0.9-1.1g/L，磷酸氢二钾0.9-1.1g/L，尿素1.8-2.2g/L，余量为水，pH 7.2-7.5；

所述发酵培养基包括如下组分：豆粕抽提物10-20g/L，葡萄糖65-75g/L，硫酸铵15-25g/L，硫酸镁0.4-0.6g/L，磷酸二氢钾0.9-1.1g/L，磷酸氢二钾0.9-1.1g/L，尿素1.8-2.2g/L，碳酸钙35-45g/L，VB3 14-16mg/L，V_H 45-55μg/L，VB1·HCl 90-110μg/L，余量为水，pH 7.2-7.5。