[发明专利]一种屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 202111121774.6 | 申请日： | 2021-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN113846115B | 公开（公告）日： | 2023-10-17 |
| 发明（设计）人： | 龙飞;李璐;彭涛;孙宝清;黄惠敏 | 申请（专利权）人： | 广州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/866;C12N9/64;C07K19/00;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/26;C07K1/36;G01N33/573;G01N33/68 |
| 代理公司： | 广州海心联合专利代理事务所(普通合伙) 44295 | 代理人： | 黄为;马赟斋 |
| 地址： | 523280 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 屋尘螨 类变应原 pro der 重组 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白，其特征在于，所述pro-Der p 1基因序列具有优化的昆虫密码子且3’端偶连His蛋白序列，序列如SEQ ID NO：1所示。
2.包含屋尘螨I类变应原pro-Der p 1基因的重组质粒，其特征在于，利用Xho I和KpnI酶切位点将具有优化的昆虫密码子且3’端偶连His蛋白序列的pro-Der p 1重组基因序列插入基于穿梭载体pFastBacTMDual改造的pFastBac-SCUVI中，获得pro-Der p 1重组质粒。
3.包含权利要求2所述重组质粒的重组杆状病毒质粒，其特征在于，所述pro-Der p 1重组质粒通过转化至DH10Bac菌株中，获得重组杆状病毒质粒Bacmid-Der p 1。
4.包含权利要求3所述的重组杆状病毒质粒的表达载体，其特征在于，将所述重组杆状病毒质粒Bacmid-Der p 1转染到Sf9细胞中，获得pro-Der p 1表达载体。
5.一种屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白的制备方法，其特征在于，合成SEQ IDNO.1所述的具有优化的昆虫密码子且连接His蛋白基因序列的pro-Der p 1基因序列，并将其通过Xho I和KpnI酶切位点连接到穿梭载体pFastBac-SCUVI上，通过转化DH10Bac感受态细胞获得Bacmid杆粒，然后转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒，采用P4代重组杆状病毒感染Sf9细胞，离心收集上清液。
6.根据权利要求5所述的屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白的制备方法，其特征在于，将收集的所述的上清液用0.45um滤器过滤；滤液His层析柱上样，淋洗后分别用50mM、100mM、200mM咪唑进行洗脱；取洗脱液跑SDS-PAGE胶，得到纯的pro-Der p 1条带，大小34kD左右；用超滤膜包对洗脱液进行浓缩和PBS置换，得到PBS重悬的纯化pro-Der p 1重组蛋白。
7.权利要求1所述的屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白在用于制备检测屋尘螨引起的过敏性疾病的诊断试剂或脱敏治疗生物制品的应用。
8.权利要求1所述的屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白在用于制备检测屋尘螨的诊断试剂或生物制品的应用。
9.权利要求1所述的屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白在检测屋尘螨的方法中的应用。
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