[发明专利]一种屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种屋尘螨I类变应原pro‑Der p 1重组蛋白及其制备方法和应用，其pro‑Der p 1基因序列具有优化的昆虫密码子且3’端偶连His蛋白序列，序列如SEQ IDNO：1所示。具体地，将具有优化的昆虫密码子且连接有His蛋白序列的pro‑Der p 1基因序列构建到基于穿梭载体pFastBac^TM Dual改造的pFastBac‑SCUVI中，获得重组杆状病毒质粒Bacmid‑Der p 1，通过转染昆虫细胞Sf9，制备和扩增重组Der p 1杆状病毒，获得表达的pro‑Der p 1重组蛋白。本发明的pro‑Der p 1重组蛋白理化特性更接近天然过敏原蛋白组分，因此检测灵敏度高，非特异性少，ELISA和液相芯片检测结果与临床过敏原特异性抗体检测ImmunoCAP结果相关性高，特别适用于屋尘螨过敏原的快速检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

尘螨、花粉和动物毛发等是引起过敏性疾病的主要过敏原，尤其是尘螨，在人们居住的环境中是一种重要过敏原。目前常见尘螨包括两种，一种是屋尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)，另一种是粉尘螨(Dermatophagoides farinae)。据报道，约60％～80％的过敏性疾病患者对屋尘螨过敏。屋尘螨的分泌物、排泄物以及虫体死亡后的降解产物都能成为过敏原。研究表明，屋尘螨粗提物中含有多种成分可与人血清IgE抗体结合，但患者的发病原因可能只与其中的某种或某些成分有关，这些成分叫做“组分”。就屋尘螨的组成成分而言，国际免疫学会联合会已经命名的组分有30多种，其中组分1和组分2被认为是屋尘螨过敏原中最主要的成分。

目前常用的过敏原特异性检测方法主要包括：体内试验(皮内试验或皮肤点刺试验)、器官激发实验(经过鼻黏膜、结膜或气道)、血清特异性IgE(specific immunoglobulinE,sIgE)检测、斑贴试验等。其中血清特异性IgE检测作为一种安全、有效、便捷的检测手段，已经广泛应用于过敏性疾病的诊断。但是，目前商品化的血清特异性IgE检测试剂大都采用的是粗提物，这些粗提物由于提取方法、后期处理及保存方法的差异，可能出现部分组分丢失或杂质蛋白较多的现象，因此容易导致假阴性结果的出现。另外，蛋白粗提取物中可能会存在与真正过敏原具有相似抗原表位的物质，这些相似的抗原表位可引起交叉反应而出现假阳性的结果。因此，提高血清特异性IgE检测结果的准确率是目前急需解决的问题。与此同时，由于粗提物中含有多种过敏原组分，同一组分在不同批次产品中的含量不一致，不利于实现产品的标准化。

因此，需要了解屋尘螨的过敏原成分，制备过敏原单组份重组蛋白，特别是屋尘螨I类过敏原Der p 1重组蛋白，为屋尘螨过敏性疾病的快速诊断提供技术手段，为临床制订有效脱敏治疗方案提供依据。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明目的之一提供了一种屋尘螨I类变应原pro-Der p1重组蛋白，特别适用于屋尘螨过敏原的快速检测与脱敏治疗。

具体地，屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白，其中，pro-Der p 1基因序列具有优化的昆虫密码子且3’端偶连His蛋白序列，序列如SEQ IDNO：1所示。本发明的pro-Derp 1重组蛋白具有较高的表达量，且与天然蛋白具有类似的生物学活性。

本发明的目的之二是提供包含上述屋尘螨I类变应原pro-Der p 1重组蛋白的重组质粒。所述重组质粒是利用Xho I和KpnI酶切位点将具有优化的昆虫密码子且3’端偶连His蛋白序列的pro-Der p 1重组基因序列插入基于穿梭载体pFastBac^TM Dual改造的pFastBac-SCUVI中获得。进一步地，所述pro-Der p1重组质粒通过转化至DH10Bac菌株中，获得pro-Der p 1重组杆状病毒质粒(即重组杆状病毒质粒Bacmid-Der p 1)。