[发明专利](2S,3S)-2-氯-3-羟基酯类化合物的制备方法

说明书

本发明属于生物技术领域，具体为(2S,3S)‑2‑氯‑3‑羟基酯类化合物的制备方法。本发明采用来源于发酵乳酸杆菌的羰基还原酶催化不对称还原2‑氯‑β‑酮酯类化合物生成化合物(2S,3S)‑2‑氯‑3‑羟基酯类化合物；包括：制备含羰基还原酶的工程菌；制备工程菌的静息细胞悬浊液，并经过超声破碎或者加压破碎后得含羰基还原酶细胞上清液，再与底物2‑氯‑β‑酮酯类化合物、葡萄糖脱氢酶、氢供体、辅因子混合，进行不对称还原反应，制得化合物(I)。本发明方法环境友好、操作简便、易于工业放大，并且底物浓度高、底物普适性广、产物收率高，具有很好的工业应用前景。

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种(2S,3S)-2-氯-3-羟基酯类化合物的制备方法。

背景技术

(2S,3S)-2-氯-3-羟基酯类化合物是一种被广泛应用于医药化工中间体，包括地尔硫卓、西拉硫卓等手性化合物，以及活性天然产物结构中的基本骨架，其结构式如下式（I）所示，式中R¹为氟、氯、溴、碘等卤素，C1-C8烷基或环烷基，噻吩基，呋喃基，萘基、吡啶基等；R²为C1-C8烷基或环烷基、单取代或多取代芳基；

（I）。

目前关于通过动态还原动力学拆分合成化合物（I）及其结构类似物的化学方法有很多报道，但这些化学方法普遍存在一些不足之处，如需要用到重金属钌以及高压条件等（Synthesis 2003, 15, 2405-2409）。不仅反应条件苛刻，而且严重污染环境，这大大限制了其在工业生产上的应用。其中生物催化动态还原动力学拆分方法由于其高立体选择性以及环境友好被大家所关注，但很少被用于合成化合物(I)及其结构类似物。Azeradzu课题组（Tetrahedron: Asymmetry 1995, 6, 2199-2210）报道了Mucor ambiguus催化还原2-氯-β-酮酯类化合物，选择性地生成(2S,3S)-2-氯-3-羟基酯类化合物，ee值高达99%，但收率仅有38%且处理产物较为复杂，此外催化底物浓度未至克级别，远远不能满足工业的需求。尽管有相关报道，但是通过羰基还原酶催化的动态还原动力学拆分来制备(2S,3S)-2-氯-3-羟基酯类化合物依然很急需，特别是适用于工业生产的方法。

本发明利用羰基还原酶催化还原化合物(II)，高效、高立体选择性（ee99%，dr99:1）地生成(2S,3S)-2-氯-3-羟基酯类化合物(I)。与传统化学方法相比，该方法具有反应条件温和、反应收率高，成本低廉等的优点，时空产率可以达到400 g·L^-1·d^-1，具备良好的工业应用价值。

发明内容

本发明目的在于提供一种底物普适性广、高底物浓度、高立体选择性、高收率的不对称还原反应合成(2S,3S)-2-氯-3-羟基酯类化合物的方法。