[发明专利]用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物、试剂盒和检测方法在审
| 申请号： | 202111125391.6 | 申请日： | 2021-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN113789397A | 公开（公告）日： | 2021-12-14 |
| 发明（设计）人： | 黄慧娜;陈新彬;莫秋华;李艳华;涂承宁;汪海波;成子栋;周小坚 | 申请（专利权）人： | 珠海国际旅行卫生保健中心（拱北海关口岸门诊部） |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/63 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 俞梁清 |
| 地址： | 519000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 霍乱弧菌 o1 o139 组合 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物，其特征在于，包括：
用于检测霍乱弧菌O1群的引物对1，其核苷酸序列为：
正向引物：5’-CATTCACTTATGTTGCCTCGGT-3’，
反向引物：5’-GACTCACCTTCGATTTCAGCA-3’；
以及，用于检测霍乱弧菌O139群的引物对2，其核苷酸序列为：
正向引物：5’-GTTCCCTTGTTAGACCACCG-3’，
反向引物：5’-CCTTTCCACCTCGGTATTTCA-3’。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括：
用于检测霍乱弧菌O1群的探针A，其核苷酸序列为：5’-AATACCATAGTCCAGTGTG-3’；
以及，用于检测霍乱弧菌O139群的探针B，其核苷酸序列为：5’-TGCTGAGTTTGCTGCCAGTT-3’。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述探针A和所述探针B的5’端均标记有荧光基团，所述探针A和所述探针B的3’端均标记有淬灭基团；且所述探针A和所述探针B所标记的荧光基团不相同。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述探针A所标记的荧光基团为FAM，所述探针B所标记的荧光基团为HEX。
5.一种用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4中任一项所述的组合物。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括四种核苷酸、阳性质控物、阴性质控物、镁离子缓冲液、甲酰胺、硫酸铵、海藻糖和Taq DNA聚合酶，所述四种核苷酸为dATP、dGTP、dCTP和dUTP。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性质控物为含有如SEQ ID NO.7所示核苷酸序列的pGEM-T载体质粒。
8.一种霍乱弧菌O1群和O139群的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
提取待测样品的DNA，在热对流PCR管中加入所述DNA，采用权利要求5至7中任一项所述的试剂盒和热对流PCR检测设备进行检测。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，在所述热对流PCR管中，每条引物的终浓度均为0.3-0.8μmol/L，每条探针的终浓度均为0.2-0.4μmol/L。
10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法的反应程序为：50℃保温8-10min；95℃热对流PCR反应45-50min。
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