[发明专利]用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物、试剂盒和检测方法

说明书

本发明属于分子生物学检测领域，公开了一种用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物、试剂盒和检测方法。该组合物包括：用于检测霍乱弧菌O1群的引物对1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1‑2所示；用于检测霍乱弧菌O139群的引物对2，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3‑4所示。该组合物还可包括：用于检测霍乱弧菌O1群的探针A，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示；用于检测霍乱弧菌O139群的探针B，其核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。本发明所述检测方法的特异性好，灵敏度高，还具有简便、快速和实用的特点，能够满足现场和野外环境下对于霍乱弧菌的检测需要。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，特别涉及用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物、试剂盒和检测方法。

背景技术

霍乱(Cholera)是一个古老的烈性肠道传染病，被称为“摧毁地球最可怕的瘟疫之一”。其临床表现为急性腹泻、呕吐，泻吐频繁、量大，为米泔水样，从而导致脱水、电解质紊乱及周围循环衰竭，严重者可致休克、酸中毒，如不及时抢救，病死率甚高。轻症患者有时类似肠炎，易于漏诊或误诊，其危害性同样不可忽视。革兰氏阴性菌-霍乱弧菌(Vibriocholerae，VC)是引起霍乱的病原菌。

霍乱弧菌在分类上为弧菌科弧菌属。根据菌体(O)抗原不同，可将霍乱弧菌分成若干O血清群。目前已分出200个以上的O血清群(O serogroups)，但仅发现O1群和O139群霍乱弧菌能引发霍乱，对于O1群和O139群以外的血清群被统称为非O1/O139群。

由于霍乱通常来势迅猛，通过水源可迅速传播等特点，易引起世界大流行，被确定为国际检疫传染病。我国在传染病防治法中规定霍乱属于甲类传染病，必须重点监测和检疫。因此，需要建立一种能应用于现场甚至野外的霍乱弧菌致病血清群(O1群和O139群)的核酸检测方法，这对于病原检出和提高疫情应对能力具有重要意义。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物、试剂盒和检测方法。所述检测方法的特异性好，灵敏度高，还具有简便、快速和实用的特点，能够满足现场和野外环境下对于霍乱弧菌的检测需要。

本发明提供了一种用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物，包括：

用于检测霍乱弧菌O1群的引物对1，其核苷酸序列为：

正向引物：5’-CATTCACTTATGTTGCCTCGGT-3’(SEQ ID NO：1)，

反向引物：5’-GACTCACCTTCGATTTCAGCA-3’(SEQ ID NO：2)；

以及，用于检测霍乱弧菌O139群的引物对2，其核苷酸序列为：

正向引物：5’-GTTCCCTTGTTAGACCACCG-3’(SEQ ID NO：3)，

反向引物：5’-CCTTTCCACCTCGGTATTTCA-3’(SEQ ID NO：4)。

采用上述用于检测霍乱弧菌O1群和O139群的组合物对待测物进行检测，可实现对霍乱弧菌O1群和霍乱弧菌O139群的同时检测，以区别其致病的具体霍乱弧菌血清群。

优选的，所述组合物还包括：

用于检测霍乱弧菌O1群的探针A，其核苷酸序列为：5’-AATACCATAGTCCAGTGTG-3’(SEQ ID NO：5)；

以及，用于检测霍乱弧菌O139群的探针B，其核苷酸序列为：5’-TGCTGAGTTTGCTGCCAGTT-3’(SEQ ID NO：6)。