[发明专利]同时检测HBA1/2、HBB和HBD基因位点多种突变的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于同时扩增HBA1/2、HBB和HBD基因突变的引物组，其特征在于，所述引物组包括：

1）HBA正向引物，选自以下的一个或多个：HBA-F1、HBA-F2、HBA-F3、HBA-F4、HBA-F5；

2）HBA反向引物，选自以下的一个或多个：HBA-R1、HBA-R2；

3）HBBD正向引物，选自以下的一个或多个：HBBD-F1、HBBD-F2、HBBD-F3、HBBD-F4、HBBD-F5、HBBD-F6、HBBD-F7、HBBD-F8、HBBD-F9；和

4）HBBD反向引物，选自以下的一个或多个：HBBD-R1、HBBD-R2、HBBD-R3；

其中所述引物在基因组上的位置如下表所示：

。

2.根据权利要求1所述的引物组，其中所述引物组包括权利要求1中所述的19条引物。

3.根据权利要求2所述的引物组，其中所述引物组中引物序列如下所示：

。

4.根据权利要求2所述的引物组，其中所述引物在5’端加上5-50nt不同序列的DNA，即Barcode，用于区分不同样本。

5.一种试剂盒，其能够同时检测HBA1/2、HBB和HBD基因位点多种突变，所述试剂盒包括以下试剂：

（1）用于多重PCR扩增HBA1/2、HBB和HBD基因片段的试剂；和

（2）用于构建三代测序文库的试剂；

其中，所述用于多重PCR扩增的试剂包括权利要求1-4任一项所述的引物组。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述的突变至少包括以下的一种或多种：

HBA1/2基因位点上引物范围内所有点突变；

表示所示的30种大片段缺失；

选自αααanti3.7，αααanti4.2，HKαα，antiHKαα；ααααanti3.7和ααααanti4.2的6种结构变异；

HBB和HBD基因位点上引物范围内所有点突变；

表2所示的28种大片段缺失；和

选自Hb Anti-Lepore和Hb Miyada的2种结构变异。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述多重PCR扩增在单反应管中完成。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于检测HBA1/2、HBB和HBD基因的不同突变是否连锁。

9.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述用于多重PCR扩增的试剂还包括DNA聚合酶、反应缓冲液。

10.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述三代测序选自Pacific Biosciences公司的PacBio测序或Oxford Nanopore Technologies（ONT）的Nanopore测序。

11.根据权利要求5所述的试剂盒，其中所述用于构建三代测序文库的试剂包括末端修复酶、接头、连接酶、DNA纯化磁珠、反应缓冲液和外切酶。