[发明专利]活性海星肽的分离纯化方法、活性海星肽及应用

说明书

本发明提供了一种活性海星肽的分离纯化方法、活性海星肽及应用，涉及海星肽分离纯化技术领域。该分离纯化方法通过将海星肽粗品采用凝胶色谱柱层析的方法进行纯化分离，得到活性海星肽；该分离纯化方法简单、易操作，制备过程安全、环保，丰富了对海星中活性物质的研究，为促进海星资源应用提供了理论基础和实验依据。本发明还提供了采用上述分离纯化方法制得的活性海星肽，该活性海星肽具有纯度高、活性高、生物相容性好、安全无副作用等优点，具有良好的应用前景。本发明还提供了上述活性海星肽在制备抑制乳腺癌细胞MCF‑7增殖药物或制备用于抗乳腺癌药物中的应用。

技术领域

本发明涉及海星肽分离纯化技术领域，尤其是涉及一种活性海星肽的分离纯化方法、活性海星肽及应用。

背景技术

罗氏海盘车（Asterias rollestoni），别名海星，属棘皮动物门海星纲钳棘目海盘车科动物。我国威海地区水产资源丰富，沿海地区海星产量大，但对海星资源并无有效的开发利用。海星中的主要活性物质包括海星多肽、海星多糖和海星皂苷等，药用价值丰富。海星中有一些多糖有较强的抗菌抗病毒作用，海星总皂苷具有溶血作用。面包海星皂苷-l(astemsaponins-1)对体外恶性胶质细胞瘤细胞U87MG的生长有明显的抑制作用，并能促其凋亡。而目前对于海星的研究主要集中在海星多糖、海星皂苷等方面，对海星多肽的研究较少。

乳腺癌是乳腺上皮细胞在多种致癌因子的作用下，发生增殖失控的现象。乳腺癌常被称为“粉红杀手”，其发病率位居女性恶性肿瘤的首位，男性乳腺癌较为少见。在我国，乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，每年有30余万女性被诊断出乳腺癌。在东部沿海地区及经济发达的大城市，乳腺癌发病率上升尤其明显。据 2020 年世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布全球近 190 个国家最新癌症负担数据显示，乳腺癌发病率位居全球第一。

临床治疗乳腺癌的主要方法是手术联合放疗和化疗，然而手术治疗容易复发，放、化疗具有很强的毒副作用，而化疗药物虽对大多数肿瘤有一定的疗效，但选择性差、毒副反应大、耐药性等问题依然非常明显。因此，寻找高效、低毒、特异强的抗肿瘤药物仍势在必行。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种活性海星肽的分离纯化方法。

本发明的第二目的在于提供一种活性海星肽，采用上述分离纯化方法制得。

本发明的第三目的在于提供上述活性海星肽的应用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种活性海星肽的分离纯化方法，包括以下步骤：

（1）提供海星经仿生酶解得到的海星肽粗品；

（2）将海星肽粗品采用凝胶色谱柱层析的方法进行纯化，包括：

（a）将海星肽粗品和纯水混合后，分离，得到海星肽样品；

（b）将已溶胀好的层析填料装柱，采用流动相进行压柱，至柱均匀性达到要求；

（c）将海星肽样品进样，洗脱，收集洗脱液，并于280nm下测量紫外吸光度，收集海星肽样品峰；

（d）将洗脱液进行干燥，得到活性海星肽。

进一步的，在本发明上述技术方案的基础之上，步骤（a）中，分离所采用的过滤膜孔径为0.45μm。

进一步的，在本发明上述技术方案的基础之上，步骤（b）中，层析填料包括Superdex 30，柱体积为60mL。

进一步的，在本发明上述技术方案的基础之上，步骤（b）中，流动相为双蒸水。

进一步的，在本发明上述技术方案的基础之上，步骤（c）中，所述洗脱采用蒸馏水进行等度洗脱，洗脱1.5个柱体积。