[发明专利]一种鱼类脂肪组织沉积部位和脂肪细胞特征的鉴定方法

说明书

本发明涉及一种鱼类脂肪组织沉积部位和脂肪细胞特征的鉴定方法，属于细胞生物学领域，所述的方法具体如下：将检测鱼体置到‑20℃冷冻；使用CT对脂肪沉积情况进行量化，预测脂肪组织可能的沉积位置；取预测的脂肪沉积位置的组织用石蜡包埋，制作石蜡切片、染色，在光学显微镜下进行镜检检测组织的形态；然后使用分子标记确定脂肪组织沉积的具体位置；再用OTC包埋制作切片，在光学显微镜和荧光显微镜下进行镜检，观察脂肪组织内脂肪细胞的脂滴情况；最后在透射电子显微镜下进行电镜检测，观察脂肪组织的超微结构。本发明方法为后续改善鱼类脂肪异常沉积及脂肪组织相关研究提供理论基础。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种鱼类脂肪组织沉积部位和脂肪细胞特征的鉴定方法。

背景技术

水产养殖为人类提供了大量优质安全的蛋白质及EPA和DHA等多不饱和脂肪酸，是人类膳食和国家食品安全战略的重要组成部分。我国是世界上水产养殖产量最大的国家，但随着鱼粉鱼油等饲料资源逐年短缺，价格不断攀升，严重限制了水产养殖业的发展。利用脂肪的蛋白质节约效应和使用价格低廉的植物油替代鱼油成为了水产养殖业绿色可持续发展的必然选择。然而，随着集约化养殖的不断发展，这类饲料的大量使用往往会引起鱼体脂肪过度沉积，影响鱼类的生长速度和免疫力，最终导致养殖产量的下降。因此如何调控并降低鱼体脂肪过度沉积是目前亟待解决的问题。要解决这一问题，首先要精准的了解鱼体脂肪组织的分布位置及脂肪的沉积位点。

脂肪组织是鱼体脂肪积累的重要部位，鱼体过多的能量主要以甘油三酯的形式储存在脂肪组织中，在营养不足时分解为生命活动提供能量。脂肪组织主要由脂肪细胞组成，其主要通过脂肪细胞的增生和肥大进行组织体积的扩张。研究发现草鱼，鲈鱼等鱼类脂肪组织分布在腹腔内，其脂肪易在腹腔及肝脏中沉积，而大菱鲆的脂肪组织主要分布在鳍边。因此，不同鱼类脂肪组织的分布位置及脂肪沉积的位点存在明显的差异。目前关于鱼类脂肪沉积模式的相关研究往往不够全面和缺乏代表性，没有一套系统且可应用推广至所有鱼类的脂肪组织的鉴定方法。因此，建立一套完善的鱼类脂肪组织的鉴定方法十分重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种鱼类脂肪组织沉积部位和脂肪细胞特征的鉴定方法，使用该种方法能有效地实现鱼类脂肪组织沉积位点的鉴定。

本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：

一种鱼类脂肪组织沉积部位和脂肪细胞特征的鉴定方法，所述的方法具体如下：

1)取待检测鱼类，将检测鱼体躯干笔直放置到-20℃冷冻至鱼体坚硬；使用微型X射线断层造影技术(CT)检测全鱼脂肪分布及沉积情况，预测脂肪组织可能的沉积位置；

2)随后取同等规格的健康的未经冰冻的鱼，取出经CT确认后的可能的脂肪沉积部位的组织，修剪平整后，在固定液中固定24h；

3)取步骤2)固定后的组织用石蜡包埋，将石蜡包埋后的组织块制作石蜡切片，使用苏木素和伊红进行HE染色，在光学显微镜下进行镜检检测各组织的形态；然后再用脂肪组织的分子标记确定脂肪组织沉积的具体位置；

4)另取经步骤3)确定的脂肪组织固定后用OCT包埋，将OCT包埋后的组织块在冰冻切片机中制作冰冻切片，冰冻切片经过固定后分别使用油红O及BODIPY进行染色，在光学显微镜和荧光显微镜下进行镜检，检测脂肪组织内脂肪细胞的脂滴情况；

5)另取经步骤4)确定的脂肪组织固定后用树脂包埋，将树脂包埋后的组织块制作超薄切片，使用醋酸铀和柠檬酸铅染色，在透射电子显微镜进行电镜观察脂肪组织的超微结构。

本发明与现有技术相比的有益效果：