[发明专利]一种宽裂解谱肠出血性大肠杆菌噬菌体、包括噬菌体的抑菌剂及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种宽裂解谱肠出血性大肠杆菌噬菌体及其应用。所述噬菌体菌株保藏号为CCTCC NO：M 20211003，于2021年8月10日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，分类命名为肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体vB_EcoM_SQ17，Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 phage vB_EcoM_SQ17；对肠出血性大肠杆菌具有高效杀菌能力，能够裂解肠出血性大肠杆菌O157:H7，也能裂解其他致病性大肠杆菌。本发明在全脂牛奶和脱脂牛奶中均对肠出血性大肠杆菌具有较好的抑菌效果。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种宽裂解谱肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌 体，包括噬菌体的抑菌剂及制备方法和应用。

背景技术

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)O157:H7是一种重要的 食源性人兽共患病原菌，家禽家畜是主要的携带者，能够定植在动物和人的肠道及呼吸道， 易污染食品如牛奶等而引起食物中毒，存在着疫情暴发和流行的潜在威胁。肠出血性大肠杆 菌O157:H7的危害在于不仅导致肉蛋奶等食品污染和动物腹泻，而且还会引发人的腹泻和出 血性肠炎，易继发溶血性尿毒综合征(HUS)及血栓形成性血小板减少性紫癫(TTP)等症 状。HUS和TTP的病情凶险，病死率高。该病原菌引起的危害已成为全球性问题。

目前，针对肠出血性大肠杆菌O157:H7引发的感染，有研究表明，使用抗生素无益甚至 会有副作用，是否使用抗生素控制和治疗仍有争议。并且，虽然抗生素能够在一定程度上抑 制细菌感染，但抗生素的长期使用导致产生多重耐药菌和超级细菌，形成恶性循环。裂解性 噬菌体是一种分离于自然界中，能够特异性侵染并裂解细菌的病毒。近年来的研究表明，噬 菌体作为一种新型安全的抗菌药物具有高效快速、特异性高、安全性高、很难产生抗性菌、 能够有效裂解多重耐药菌等优点，得到越来越多的重视。国内外越来越多的研究结果表明噬 菌体具有很高的杀菌性、具有更广的裂解谱和难产生抗性菌、对耐药性致病菌的裂解性和其 他抗菌剂协同作用的高效性，并且由体内使用噬菌体导致动物体内产生的抗体没有影响噬菌 体的作用。因此该研究有望将肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体研发成为一种防治由肠出血 性大肠杆菌O157:H7感染引起的疾病和控制动物源性食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的新 型抗菌制剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一株宽裂解谱肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体、包括噬菌体的 抑菌剂及制备方法和应用，本发明的噬菌体对肠出血性大肠杆菌O157:H7具有强裂解作用， 能够用于抑制肠出血性大肠杆菌O157:H7。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一株宽裂解谱肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体，所述宽裂解谱肠出血性 大肠杆菌O157:H7噬菌体保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 20211003。

本发明提供了上述方案所述肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体的培养方法，包括以下步 骤：

1)对肠出血性大肠杆菌O157:H7培养物进行离心，收集沉淀；

2)利用LB培养基对步骤1)所述沉淀进行重悬，得到菌悬液，在菌悬液中加入上述

方案所述肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体，于37℃条件下培养6～8h后，离心，取上 清液，上清液经过0.22μm滤膜过滤，得到肠出血性大肠杆菌O157:H7噬菌体裂解液。

优选的，步骤1)中所述肠出血性大肠杆菌O157:H7培养物浓度为1×10⁸CFU/ml～1×10¹⁰ CFU/ml。