[发明专利]一种脑特异性蛋白产物9.5的冻干方法

说明书

本发明属于脑特异性蛋白产物9.5保存技术领域，具体涉及一种脑特异性蛋白产物9.5的冻干方法。所述冻干方法包括以下步骤：取脑特异性蛋白产物9.5和缓冲液配制成溶液，设置冻干程序进行冻干，所述缓冲液的组成包括以下组分：4‑吗啉乙磺酸、NaCl、ZnCl₂、MgCl₂·6H₂o、牛血清白蛋白、酪蛋白、甘氨酸、聚乙二醇、海藻糖。能够有效保存脑特异性蛋白产物9.5，冻干品复融后可有效保存其活性，提高检测灵敏度；所述冻干保护方法对脑特异性蛋白产物9.5的保存具有较好的保存效果，可以使得PGP9.5在4‑8℃储存期达到18个月、在‑20℃储存期达到3年。

技术领域

本发明属于脑特异性蛋白产物9.5保存技术领域，具体涉及一种缓冲液及脑特异性蛋白产物9.5的冻干方法。

背景技术

泛素-蛋白酶体途径是调控细胞内蛋白活性的一个重要途径。其调控的对象主要是细胞内结构受损或需要及时清除的功能蛋白。泛素-蛋白酶体途径的调节与细胞周期、信号转导、发育分化、物质代谢等很多过程密切相关，目前认为泛素-蛋白酶体系统主要通过泛素化酶和去泛素化酶来实现对目的蛋白快速精确的调控。

脑特异性蛋白产物9.5(protein gene product 9.5，PGP9.5)，又名泛素羧基端水解酶(Ubiquitin carboxy-terminal hydrolase，UCH-L1)，是由223个氨基酸组成的一类半胱氨酸水解酶，分子量约为24800Da。UCH-L1在TBI发生后的1小时内会通过血脑屏障进入血液，导致血清UCH-L1显著升高。对TBI的早期诊断，鉴别诊断和判断预后有重要的意义，临床上主要用于脑外伤的辅助诊断。如中国专利申请CN201880020489.5公开的使用早期生物标记物泛素羧基末端水解酶L1(UCH-L1)帮助诊断和评价已遭受或可能已遭受对头部的损伤、诸如轻度或中度至重度创伤性脑损伤(TBI)的人类受试者的方法。在此还公开了帮助基于UCH-L1的水平确定已遭受或可能已遭受对头部的损伤的受试者是否将受益于并因此接受头部计算机断层(CT)扫描的方法。这些方法涉及在人类受试者已遭受或可能已遭受对头部的损伤后24小时内的时间点取自所述受试者的一个或多个样品中检测UCH-L1的水平和UCH-L1水平的变化。

因此，泛素羧基端水解酶的保存具有及其重要的意义。但现有技术中并没有针对性的保存方法，现有方法中，并不能很好地提高泛素羧基端水解酶的保存效果，其复融后的活性以及检查灵敏度等性能均受到不同程度的影响。

本发明的目的旨在提供一种脑特异性蛋白产物9.5的冻干方法，以提高使脑特异性蛋白产物9.5的保存活性，以期更好的发展脑特异性蛋白产物9.5的检测技术。

发明内容

为克服以上技术问题，本发明提供了一种缓冲液，该缓冲液能够有效提高PGP9.5的活性、提高抗原冻干品的检测灵敏度，同时能够有效延长PGP9.5的保存期限。

为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：

一种脑特异性蛋白产物9.5的冻干方法，包括以下步骤：取脑特异性蛋白产物9.5和缓冲液配制成溶液，设置冻干程序进行冻干，其中，所述缓冲液包括以下组分：4-吗啉乙磺酸、NaCl(氯化钠)、ZnCl₂(氯化锌)、MgCl₂·6H₂o(六水合氯化镁)、牛血清白蛋白、酪蛋白、甘氨酸、聚乙二醇、海藻糖。

优选地，按照重量份数计，所述缓冲液，包括以下组分：4-吗啉乙磺酸5-30份、NaCl8-12份、ZnCl₂ 0.01-0.5份、MgCl₂·6H₂o 0.1-15份、牛血清白蛋白2-50份、酪蛋白2-50份、甘氨酸1-15份、聚乙二醇0.2-25份、海藻糖10-100份。