[发明专利]一种用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的引物探针组合及试剂盒

权利要求书

1.一种用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括HIST1H4F基因的甲基化引物和探针；

所述HIST1H4F基因的甲基化引物包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

所述HIST1H4F基因的探针包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；

所述引物探针组合还包括内参基因的甲基化引物和探针；

所述内参基因包括ACTB基因；

所述ACTB基因的甲基化引物包括如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列；

所述ACTB基因的探针包括如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的引物探针组合，其特征在于，所述HIST1H4F基因的探针的5'端标记有荧光基团A，3'端标记有淬灭基团A；

所述内参基因的探针的5'端标记有荧光基团B，3'端标记有淬灭基团B，其中，所述荧光基团A与荧光基团B不同，所述淬灭基团A和淬灭基团B相同或不同。

3.一种如权利要求1-2中任一项所述的引物探针组合在制备用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的试剂盒中的应用。

4.一种用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-2中任一项所述的引物探针组合。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括PCR反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺和Taq酶。

7.一种如权利要求4-6中任一项所述的试剂盒的非治疗和诊断疾病为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

（1）提取样本的基因组DNA；

（2）对步骤（1）中所述提取得到的DNA进行亚硫酸盐转化，得到转化后的DNA；

（3）将步骤（2）所述甲基化的DNA与引物探针组合混合，制备得到PCR反应体系，并进行PCR扩增检测，根据所述PCR扩增的结果得到检测结果。

8.根据权利要求7所述的试剂盒的非治疗和诊断疾病为目的的使用方法，其特征在于，步骤（1）所述样本包括尿沉渣细胞。

9.根据权利要求7所述的试剂盒的非治疗和诊断疾病为目的的使用方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为：

95℃变性5分钟；随后95℃变性20秒、60℃退火30秒，并进行45个循环；而后，38℃维持30秒；

其中，所述检测结果的判读标准为：

内参基因的Ct值Ct≤36，HIST1H4F基因的Ct值≤40，则结果为阳性；

内参基因的Ct值≤36，HIST1H4F基因的Ct值40或无扩增，则结果为阴性；

内参基因的Ct值36或无扩增，HIST1H4F基因的Ct值为任何结果，结果皆为无效，需要重新提取转化样本后检测。