[发明专利]一种用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的引物探针组合及试剂盒

说明书

本发明提供了一种用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的引物探针组合及试剂盒。所述引物探针组合包括HIST1H4F基因的甲基化引物和探针，所述HIST1H4F基因的甲基化引物包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，所述HIST1H4F基因的探针包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。所述试剂盒包括所述引物探针组合、PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品。本发明提供的试剂盒能够用于膀胱癌的早期筛查、复发监测，具有灵敏度高、特异性强、方便快捷的优点，且样本为尿沉渣细胞，能够进行无创检测，可应用性强，具有很高的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及一种用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的引物探针组合及试剂盒。

背景技术

膀胱癌作为最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一，其发病率在2014年约为57.1％，死亡率约为23.5％，其发病率随年龄增长而增加，其中男性发病率为女性的3～4倍。有研究表明50％～70％的非肌层浸润性膀胱癌会出现复发，且多在1～2年内复发，有10％～20％伴有恶性程度增加或向浸润性肿瘤发展，严重影响患者的生存率。目前常用的膀胱癌检查方法有膀胱镜检查及其对可疑病变组织进行活检、尿脱落细胞学检测、影像学检查以及荧光原位杂交等。

膀胱镜作为一种侵袭性的检查方法，属于有创性检查且价格昂贵，给患者带来痛苦以及经济负担；尿脱落细胞学检查灵敏度低，给临床应用带来不便；影像学检查放射副作用大，难以作为早期诊断和密切术后监测的普适手段。荧光原位杂交方法检测膀胱癌的敏感度高但特异性相对较低，尚未在临床上广泛应用。因此，找到一种灵敏度高、特异性好、高度准确的膀胱癌无创检测技术，对膀胱癌的早期诊断、治疗和预后监测具有非常重要的现实意义。

由于DNA甲基化往往发生在癌症发生过程的早期，所以在肿瘤诊断中应用越来越广泛。由于抑癌基因启动子高甲基化在膀胱癌中很常见，潜在的DNA甲基化标记在血清、膀胱冲洗液、尿液样本和癌症组织中已鉴定出膀胱癌。因此，检测DNA甲基化状态可以作为膀胱癌早期发现、有效治疗和准确预后的可靠途径。

CN105274100A公开了一种人TWIST1/Vimentin基因甲基化检测标志物以及试剂盒。所述人TWIST1/Vimentin基因甲基化检测标志物包括TWIST1、Vimentin和ACTB三种基因的甲基化引物和探针，能够用于膀胱癌的检测、辅助诊断以及复发的预测、疗效评价，具有灵敏度高、特异性强、检测成本低的优点。但该研究并没有公开其他基因的甲基化引物和探针应用于膀胱癌检测。

CN111826446A公开了一种用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物、探针和试剂盒。所述用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物，包括用于检测PCDH17基因的引物、POU4F2基因的引物和PENK基因的引物，得到的试剂盒能够用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断，具有无创便捷、高敏感度以及特异性强的优点。但该研究仅针对PCDH17、POU4F2和PENK基因引物做了探究。

CN108441561A公开了一种双重甲基化荧光定量PCR法用于膀胱癌早期筛查检测的试剂盒。所述试剂盒包括p16和RASSF1A两个靶基因的引物及探针及GAPDH的正向引物及探针，能够用于膀胱癌的检测，检测灵敏性高且特异性好。但该研究同样仅针对特定基因做了探究。

基于以上研究，通过检测DNA甲基化状态可以有效进行膀胱癌早期筛查和临床诊断。但膀胱癌DNA分子甲基化检测并没有其特有的基因，多数研究是联合几个基因同时检测尿液中基因甲基化水平，以此来提高灵敏度和特异性。因此，找到一种基于特定基因的引物和探针的灵敏度高、特异性好、高度准确的膀胱癌无创检测技术，是目前临床上亟需解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和现实实际的需求，本发明的目的在于一种用于膀胱癌早期筛查和/或预后监测的引物探针组合及试剂盒。本发明提供的利用所述探针引物组合制备的试剂盒能够对膀胱癌基因进行特异性检测，具有高灵敏度、高准确度的优点，且操作简便，可应用性强。