[发明专利]鉴定钩吻及易混淆品和待测样本是否掺入钩吻的方法

权利要求书

1.一种用于快速鉴别钩吻及其易混淆品的方法，其包括以下步骤：

1)提取钩吻及其易混淆品的植物或药材的样本中的DNA，获取所述样本中的全基因组DNA；

2)以所述全基因组DNA为模板，通过HRM-PCR扩增，获得包含完整内部转录间隔区2序列区域的扩增产物；

3)对扩增过程中的HRM曲线进行分析，从而实现所述钩吻及其易混淆品的鉴别。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述钩吻为马钱科钩吻原植物及其药材。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述易混淆品为忍冬、粗叶榕、狼毒及白屈菜的原植物及其药材。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述HRM-PCR扩增使用SEQ ID No.1:5'-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'的正向引物和SEQ ID No.2:5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'的反向引物。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述HRM-PCR扩增的体系包含12.5ul2×HRM PCR Master Mix，所述正向引物和所述反向引物各1ul和2.5uM，所述全基因组DNA模板2ul，并且向所述体系中加灭菌双蒸水至25ul。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述HRM-PCR扩增的程序为：94℃，5min；94℃30s，56℃30s，72℃45s，40个循环；HRM，2s，75℃-95℃。

7.一种用于鉴定待测样本中是否掺入钩吻的方法，其包括以下步骤：

1)从待测样本中分离提取总DNA并且获取所述待测样本中的全基因组DNA，同时提取已知的钩吻样本的总DNA作为阳性对照组；

2)以所述全基因组DNA为模板，通过HRM-PCR扩增，获得包含完整内部转录间隔区2序列区域的扩增产物；

3)对扩增过程中的HRM曲线进行分析，将所述待测样本的HRM曲线与所述阳性对照组相比较，从而鉴定所述待测样本中是否掺入钩吻。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述钩吻为马钱科钩吻原植物及其药材，所述待测样本包含忍冬、粗叶榕、狼毒及白屈菜的原植物及其药材；优选地，所述钩吻的DNA浓度与所述待测样本的总DNA浓度之比为0％、10％、25％、50％、75％、90％、100％。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述HRM-PCR扩增使用SEQ ID No.1:5'-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'的正向引物和SEQ ID No.2:5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'的反向引物。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的方法，其中所述HRM-PCR扩增的体系包含12.5ul2×HRM PCR Master Mix，所述正向引物和所述反向引物各1ul和2.5uM，所述全基因组DNA模板2ul，向所述体系中加灭菌双蒸水至25ul；并且所述HRM-PCR扩增的程序为：94℃，5min；94℃30s，56℃30s，72℃45s，40个循环；HRM，2s，75℃-95℃。