[发明专利]一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法

说明书

本发明提供一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，属于医疗检测技术领域。所述方法包括以下步骤：S1、取尿液样品涡旋混匀，加入50ng同位素内标，加入β‑葡萄糖醛酸酶、乙酸铵，充分振荡，于37℃水浴条件下水解100min，取出降至室温，乙腈定容，冷冻2h，取出恢复常温后，过0.22μm有机滤膜，得样品溶液；S2、采用LC‑MS/MS对样品溶液进行测试，S3、对照标准曲线进行对邻苯二甲酸酯代谢物进行定性或者定量分析。本发明提供的检测方法具有检测时间短、精密度高、回收率高的优点。

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体涉及一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法。

背景技术

邻苯二甲酸酯(PAEs)是环境中普遍存在的污染物，常被用于生产日常生活用品，主要用作增塑剂。日常生活中的玩具、食品包装、乙烯地板、润滑剂、粘合剂、洗涤剂、化妆品、药物涂层和医疗器械等都含有一种或多种PAEs。PAEs可通过呼吸道、饮食摄入和皮肤吸收等途径进入人体。已有研究指出PAEs具有致癌性、生殖发育毒性和内分泌干扰作用。PAEs在人体内的半衰期较短，低于48h，经肝脏等器官代谢解毒，形成邻苯二甲酯代谢物(mPAEs)从尿液和粪便等途径排出体外。因此，可以通过检测人体尿液中的mPAEs的含量来评估人体PAEs的暴露水平和负荷。

目前，已有很多文献报道了不同的方法应用于尿液中mPAEs的分析，这些方法大多需要对尿液进行一定的前处理，比如最常见的利用离线固相萃取技术对尿液中mPAEs进行富集和净化，方法流程繁琐，溶剂用量大，费时低效，且不利于开展大规模的人体样品筛查。中国专利CN 112782295 A报道了一种在线测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，通过在线固相萃取技术对mPAEs进行富集和净化，再通过液相色谱分离，三级四重杆质谱检测，该法耗时较长，对仪器要求高。中国专利CN 111505144 A报道了一种简易监测人体尿样中多种增塑剂的分析方法，该法利用液液萃取技术对mPAEs进行富集和净化，再通过HPLC-MS/MS进行检测分析，还是存在前处理耗时长，对仪器要求高的缺陷。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的缺陷，从而提供一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，用于大规模尿液样品的快速检测。

本发明提供的一种快速测定尿液中邻苯二甲酸酯代谢物含量的方法，包括以下步骤：

S1、取尿液样品涡旋混匀，加入50ng同位素内标，加入β-葡萄糖醛酸酶、乙酸铵，充分振荡，于37℃水浴条件下水解100min，取出降至室温，乙腈定容，冷冻2h，取出恢复常温后，过0.22μm有机滤膜，得样品溶液；

S2、采用液相色谱-串联质谱对样品溶液进行测试，

其中，液相色谱条件为：

色谱柱为Waters苯基柱，流速0.3mL/min，进样量为5μL，柱温流动相A为0.1％乙酸水溶液，流动相B为乙腈溶液，梯度洗脱程序为：0-4min时，流动相B体积分数为5％；4-6min时，流动相B体积分数为60％；6-8.5min时，流动相B体积分数为90％；8.5-10min时，流动相B体积分数为5％；

其中，质谱条件为：

离子化方式：ESI；电离方式：负电离模式；碰撞气类型：氩气；雾化气流量：3L/min；加热气流量：10L/min；干燥气流量：10L/min；接口温度：300℃；脱溶剂温度：526℃；DL温度：250℃；加热块温度：400℃；扫描模式：MRM；

S3、对照标准曲线进行对邻苯二甲酸酯代谢物进行定性或者定量分析。

优选地，步骤S1中，所述乙酸铵的浓度为1mol/L，所述尿液样品与乙酸铵的体积比为4:0.5-1.5。

优选地，步骤S1中，冷冻的温度为-25℃。