[发明专利]一种抗磷脂综合征相关蛋白包被磁珠的方法及其应用

权利要求书

1.一种抗磷脂综合征相关蛋白包被磁珠的方法，其在包被过程中采用的活化剂中包含EDC，且所述活化剂的用量为：活化剂中EDC的质量与磁珠的质量比为(4～32.4)μg:1mg，优选为(20～32.4)μg:1mg；

进一步优选地，所述活化剂选自EDC-HCL、EDC-HCL和NHS的混合物、以及EDC-HCL和硫代NHS的混合物中的任意一种；更进一步优选地，包被过程采用的EDC-HCl的质量与磁珠的质量比为(5～40)μg:1mg，优选为(25～40)μg:1mg。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1-1，将磁珠与偶联缓冲液混合，获得包含磁珠的混合液；

S1-2，将包含磁珠的混合液与待包被的抗磷脂综合征相关蛋白混合，反应后制得产物混合物；

S1-3，将产物混合物与活化剂混合，反应后制得包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠；

或者

S2-1，将磁珠与偶联缓冲液混合，获得包含磁珠的混合液；

S2-2，将包含磁珠的混合液与活化剂混合，反应后制得产物混合物；

S2-3，将产物混合物与待包被的抗磷脂综合征相关蛋白混合，反应后制得包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠；

或者

S3-1，将磁珠与偶联缓冲液混合，获得包含磁珠的混合液；

S3-2，将包含磁珠的混合液与活化剂、待包被的抗磷脂综合征相关蛋白混合，反应后制得包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：

将所述包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠进行超声处理。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，所述方法不包括使用封闭剂对所述包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠进行封闭处理的步骤。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述磁珠选自羧基磁珠、羟基磁珠、氨基磁珠和NHS磁珠中的至少一种，优选为羧基磁珠；和/或

所述偶联缓冲液选自MES缓冲液、PBS缓冲液和HEPES缓冲液中的至少一种，优选为MES缓冲液；和/或

所述储存缓冲液选自PBS缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液和HEPES缓冲液中的至少一种，优选为PBS缓冲液。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于，所述待包被的抗磷脂综合征相关蛋白的用量与磁珠的质量比为(5～40)μg:1mg；

优选地，所述待包被的抗磷脂综合征相关蛋白为β2糖蛋白I或者β2糖蛋白I与心磷脂的混合物；进一步优选地，所述β2糖蛋白I与心磷脂的混合物中β2糖蛋白I与心磷脂的质量比为(1:4)～(4:1)；优选为1:1。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述方法，其特征在于，

步骤S1-2和步骤S2-2中，所述反应的温度各自独立地为20～30℃，所述反应的时间各自独立地为15min～45min；和/或

步骤S1-3、步骤S2-3和步骤S3-2中，所述反应的温度各自独立地为20～30℃，所述反应的时间各自独立地为2h～4h。

8.一种如权利要求1-7中任意一项所述的方法制得的包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠。

9.一种如权利要求8所述的包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠在检测抗磷脂综合征相关抗体中的应用；优选地，所述抗体为抗β2糖蛋白I抗体和/或抗心磷脂抗体。

10.一种检测抗磷脂综合征相关抗体的试剂盒，其包括如权利要求8所述的包被有抗磷脂综合征相关蛋白的磁珠；

优选地，当所述抗磷脂综合征相关蛋白为β2糖蛋白I时，所述试剂盒用于检测抗β2糖蛋白I抗体；当所述抗磷脂综合征相关蛋白为β2糖蛋白I与心磷脂的混合物时，所述试剂盒用于检测抗心磷脂抗体。