[发明专利]一种抗磷脂综合征相关蛋白包被磁珠的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种抗磷脂综合征相关蛋白包被磁珠的方法及其应用。该方法在包被过程中采用的活化剂中包含EDC，且所述活化剂的用量为：活化剂中EDC的质量与磁珠的质量比为(4～32.4)μg:1mg。本发明所述方法通过控制活化剂中EDC的用量，使包被后的磁珠可以用于多个项目的使用，具有批间重复性好的优点；通过超声处理包被后的磁珠，使包含包被后的磁珠工作液颗粒分散更均一、重复性好、批间和批次差异小。同时去除了封闭处理步骤，提高了试剂分析灵敏度，能够较好地应用在检测抗磷脂综合征相关抗体(抗β2糖蛋白I抗体和/或心磷脂抗体)中。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种抗磷脂综合征相关蛋白包被磁 珠的方法及其应用。

背景技术

抗磷脂抗体(Anti-phospholipids,APL)是一族针对自身抗原包括磷脂或带负电荷磷脂与载体蛋白复合物的病理性抗体。抗磷脂抗体综合症(Anti-phospholipidsyndrome,APS)，是一种与抗磷脂抗体有关的自身免疫性疾病，典型的临床表现 有动脉静脉血栓、血小板减少以及习惯性流产等。APS多见于年轻人，60％-80％ 为女性患者，女性中位年龄为30岁。APS可分为原发性APS(PAPS)和继发性 APS(SAPS)，继发性APS多见于系统性红斑狼疮(SLE)或类风湿关节炎(R A)等 自身免疫病。此外，还有一种少见的恶性APS(catastrophic APS)，表现为短期内 进行性广泛血栓形成，造成多器官功能衰竭甚至死亡。

根据2006年《抗磷脂综合征(APS)诊断分类标准(修订)国际共识》和2019年 中华医师协会自身抗体检测专业委员会《抗磷脂抗体检测的临床应用专家共识》， 抗心磷脂抗体(anti-cardiolipin antibody，aCL)、抗β2糖蛋白I抗体 (anti-Beta-2-Glycoprotein1antibody)是抗磷脂综合征分类标准中的重要实验室指 标，目前临床上广泛应用，已成为临床实验室最为常见的自身抗体检测项目。持 续中高梯度的IgG/IgM型抗心磷脂抗体与血栓密切相关，IgG型抗心磷脂抗体与 中晚期流产相关。β糖蛋白I是与心磷脂抗体结合的辅助因子，抗β2GPI抗体对 于抗磷脂综合征的特异性可高达98％。

传统检测抗β2糖蛋白I抗体和心磷脂的方法为酶联免疫法(ELISA)和基于羧 基磁珠或链霉亲和素磁珠的化学发光法(CLIA)。然而酶联免疫法精密度、灵敏度 线性均较差，不容易实现全自动化；常规的羧基磁珠的化学发光法，包被效率低， 批间重复性差，容易聚团，且不具备通用性。

发明内容

为了克服现有技术存在的问题，本发明提供了一种抗磷脂综合征相关蛋白包 被磁珠的方法及其应用。该方法通过控制活化剂中EDC的用量，使包被后的磁 珠可以用于多个项目的使用，具有批间重复性好的优点；通过超声处理包被后的 磁珠，使包含包被后的磁珠工作液颗粒分散均一。同时去除了封闭处理步骤，提 高了试剂分析灵敏度。

为此，本发明第一方面提供了一种抗磷脂综合征相关蛋白包被磁珠的方法， 其在包被过程中采用的活化剂中包含EDC，且所述活化剂的用量为：活化剂中 EDC的质量与磁珠的质量比为(4～32.4)μg:1mg，优选为(20～32.4)μg:1mg。

在本发明的一些实施方式中，所述活化剂选自EDC-HCL、EDC-HCL和NHS 的混合物、以及EDC-HCL和硫代NHS的混合物中的任意一种。

在本发明的另一些实施方式中，包被过程采用的EDC-HCl的质量与磁珠的 质量比为(5～40)μg:1mg，优选为(25～40)μg:1mg。

在本发明的一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：

S1-1，将磁珠与偶联缓冲液混合，获得包含磁珠的混合液；

S1-2，将包含磁珠的混合液与待包被的抗磷脂综合征相关蛋白混合，反应后 制得产物混合物；