[发明专利]一种伊维菌素的制备方法

说明书

本发明公开了一种伊维菌素的制备方法，包括以下步骤：1)大孔树脂富集伊维菌素粗品；2)伊维菌素粗品通过制备液相色谱柱精制；3)通过结晶析出得到高纯度伊维菌素精粉。本发明的制备方法收率达到50％以上，伊维菌素纯度可达98％以上，各项杂质得到有效控制，可规模化生产高纯度伊维菌素。

技术领域

本发明具体涉及到一种伊维菌素的制备方法，属于生物药物的制备领域。

背景技术

伊维菌素(Ivermectin)为天然阿维菌素中的22,23-二氢阿维菌素B1a与二氢阿维菌素B1b两种同系物的混合物，二者比例为80：20。自1981年上市以来，伊维菌素一直用于农业、兽医和水产养殖，在低剂量下对多种线虫、昆虫和螨类寄生虫有效。另外，它对大多数常见的肠道蠕虫(绦虫除外)也极为有效，可以口服、局部或非肠道给药，并且与其他常用抗寄生虫化合物没有交叉耐药性的迹象。1987年伊维菌素开始用于治疗人类的多种寄生虫感染，包括头虱、疥疮、河盲症(盘尾丝虫病)、类圆线虫病、鞭虫病和淋巴丝虫病。

迄今为止，伊维菌素相关制备方法主要有两种，一种是用化学法对阿维菌素B1进行加氢选择性还原得到伊维菌素。该化学方法需要从阿维链霉菌的发酵液中分离、提纯阿维菌素B1后，将其加氢还原成伊维菌素，再进行后续的分离纯化，该制备方法工艺复杂，生产成本较高。另一种是从发酵液中直接分离纯化伊维菌素，伊维菌素发酵液成分非常复杂，尤其是与伊维菌素结构类似的杂质较多，而药用伊维菌素对相关杂质提出了较高的限度要求，如美国药典(USP)就要求控制已知杂质阿维菌素B1a≤0.7％，8a-oxo-H2B1a≤1％，H4B1a异构体和Δ2,3H2B1a之和≤2.5％，未知单杂≤0.5％，未知杂质总和≤1％；总杂≤4％。综上就给伊维菌素的直接制备工艺带来了较大的挑战，例如美国专利US6265571公开了一种从发酵液中分离纯化伊维菌素的方法，具体纯化步骤包括使用反相快速色谱系统进行梯度洗脱，尽管该方法能够提供纯度达到98％的伊维菌素高纯度标准品，但技术只适用于实验室的少量制备，不利于形成产业化。美国专利US4429042A公开了一种从发酵液中分离纯化伊维菌素的方法，具体包括使用硅胶，氧化铝，葡聚糖凝聚等填料及相应不同种类的流动相进行色谱分离得到需要的组分，该工艺操作复杂，所需溶剂种类较多，对环境污染较大，同样不利于工业化生产。

发明内容

本发明提供一种从伊维菌素发酵液直接得到高纯度伊维菌素的制备工艺，该制备方法工艺简单，伊维菌素收率高且纯度高，所用溶剂安全环保，可规模化生产。

具体而言，本发明所采用的伊维菌素的制备方法，包括以下步骤：

a)将伊维菌素发酵液固液分离，以有机溶剂I浸提菌渣，浸提液上样于大孔吸附树脂，用有机溶剂I-水溶液进行洗脱，收集洗脱液I并浓缩，在浓缩液中加入萃取剂I萃取，并将萃取有机相浓缩至膏状；

b)将步骤a)所得膏状物用有机溶剂II溶解制备上柱液，将所得上柱液进制备液相色谱柱，有机溶剂II-水溶液为流动相，色谱检测，收集伊维菌素合格组分洗脱液II；

c)将步骤b)所得洗脱液II浓缩至白色固体析出后，加入萃取剂II萃取，并将萃取有机相浓缩至膏状物后，加入有机溶剂III溶解，将所得结晶前液滴加正己烷，析出晶体，过滤烘干后即可得成品伊维菌素。

优选地，所述步骤a)中的大孔吸附树脂选自聚苯乙烯类树脂，优选LX-T28、LX-30、LX-60、LX-T83、LX-98、PAD900、SP-207，进一步优选LX-30、PAD900或SP-207，更优选LX-30。

优选地，所述步骤b)中制备液相柱的制备填料为C18填料，优选纳微C18填料、华谱C18填料、Kromasil C18填料，更优选Kromasil C18填料。

优选地，所述步骤c)中有机溶剂III优选乙酸乙酯、二氯甲烷，更优选乙酸乙酯；膏状物与有机溶剂III的质量体积比为10～30:100g/mL，优选25:100g/mL。