[发明专利]一种大肠杆菌及其在高产制备D-脯氨酸中的应用

权利要求书

1.一株产D-脯氨酸的大肠杆菌（Escherichia coli）菌株，其特征在于，已于2021年8月13日保藏于中国典型微生物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20211024。

2.如权利要求1所述的大肠杆菌菌株在生产D-脯氨酸中的应用。

3.一种制备D-脯氨酸的方法，其特征在于，采用如权利要求1所述的大肠杆菌菌株，以葡萄糖为碳源、以硫酸铵为氮源，发酵产生D-脯氨酸，从发酵液中获得D-脯氨酸。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，在发酵培养基中的葡萄糖添加量为2%-6%（w/v）；所述的硫酸铵的添加量为1%-3%。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的配方为：K₂HPO₄ 12~16g，KH₂PO₄ 4~8g，MgSO₄·7H₂O 100~300mg，(NH₄) ₂SO₄ 12~28g，MnSO₄ 1~3 mg，Fe₂ (SO₄)₃ 20~40mg，ZnCl₂ 3~10 mg，CaCl₂ 100~200 mg，葡萄糖 20~60 g，H₂O 1L。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的配方为：K₂HPO₄ 14 g，KH₂PO₄ 6 g，MgSO₄·7H₂O 200 mg，(NH₄) ₂SO₄ 20 g，MnSO₄ 1 .7 mg，Fe₂ (SO₄)₃ 25 mg，ZnCl₂ 7 mg , CaCl₂ 140 mg，葡萄糖 25 g，H₂O 1L。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，其于30-37℃、800-1200 rpm、溶氧度为饱和25%-35%发酵培养。

8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，发酵期间检测发酵液中葡萄糖的量，当其耗尽时，补入葡萄糖以保持糖浓度不超过1 g/L，且发酵过程中使用硫酸铵将pH保持在7.0。

9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，当发酵时的菌株细胞OD600达到25-35时，加入阿拉伯糖诱导物。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，加入阿拉伯糖的用量达到发酵液总量的0.02%。

11.如权利要求3-10任一项所述的方法，其特征在于，发酵时间为28-44小时。