[发明专利]检测ARv33基因表达的引物、taqman探针、RT-PCR试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测ARv33基因表达的引物，其特征在于：包括上游引物ARv33-forward和下游引物ARv33-reverse，其中ARv33-forward的序列为GTGCGCCAGCAGAAATGATTG(SEQ ID NO:13)，ARv33-reverse的序列为TCCGAAGACGACAAGATGGA(SEQ ID NO:14)。

2.一种检测ARv33基因表达的taqman探针，其特征在于该taqman探针的核酸序列为GGATGACTCTGGGAGGGAAACAGAAGT(SEQ ID NO:15)，在该核酸的5’末端连接有荧光报告基团，3’末端连接有荧光淬灭基团。

3.根据权利要求2所述的taqman探针，其特征在于：所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为MGB。

4.如权利要求1所述的引物和/或如权利要求2或3所述的taqman探针在制备用于检测雄激素受体突变基因ARv33的mRNA的试剂盒中的应用。

5.一种检测ARv33基因表达的RT-PCR试剂盒，其特征在于：包括引物、RT-PCR扩增缓冲液。

6.根据权利要求5所述的检测ARv33基因表达的RT-PCR试剂盒，其特征在于：所述引物为权利要求1中所述的上游引物ARv33-forward和下游引物ARv33-reverse。

7.根据权利要求5或6所述的检测ARv33基因表达的RT-PCR试剂盒，其特征在于还包括taqman探针。

8.根据权利要求7所述的检测ARv33基因表达的RT-PCR试剂盒，其特征在于：所述taqman探针的核酸序列为GGATGACTCTGGGAGGGAAACAGAAGT(SEQ ID NO:15)，在该核酸的5’末端连接有荧光报告基团，3’末端连接有荧光淬灭基团。

9.一种检测ARv33基因表达的RT-PCR方法，采用如权利要求8所述的RT-PCR试剂盒，其特征在于按照以下步骤进行：

步骤S1，提取样本总RNA，逆转录得到cDNA模板；

步骤S2，配置PCR反应体系；

步骤S3，PCR反应：

①热启动：95℃5min，单个循环；

②变性：95℃10s；

③退火：60℃10s；

④延伸：72℃30s；

重复步骤②～④，共40个循环；

步骤S4，数据处理和分析。