[发明专利]检测ARv33基因表达的引物、taqman探针、RT-PCR试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种检测雄激素受体突变ARv33基因表达的引物、taqman探针、RT‑PCR试剂盒及检测方法，引物包括上游引物序列如SEQ ID NO:13所示，下游引物序列如SEQ ID NO:14所示，taqman探针的核酸序列如SEQ ID NO:15所示；同时公开了采用前述引物和taqman探针来检测ARv33基因表达的RT‑PCR试剂盒，以及检测方法。

技术领域

本发明属于动物细胞基因领域，涉及人体变异基因的检测，具体涉及检测ARv33基因表达的引物、taqman探针、RT-PCR试剂盒及检测方法。

背景技术

前列腺癌是一种常见的男性肿瘤。研究发现雄激素受体(androgen receptor，AR)在原发性和转移性前列腺癌的发展过程中发挥关键作用。雄激素剥夺疗法(ADT)通过减少雄激素生成达到抑制AR信号通路的目的，是临床上治疗前列腺癌的标准疗法。但是，多数患者最终将发展到去势抵抗性前列腺癌(CRPC)阶段。近年来，业界新开发的抗雄激素受体药物恩杂鲁胺 (enzalutamide，Enz)能够更好的阻断雄激素与AR的结合，提高晚期患者生存期。然而，多数雄激素剥夺疗法患者会出现Enz耐药，导致治疗失败。研究者提出了几种解释这一现象的机制。但目前仅有AR的一种剪接突变(Arv7) 得到确切的临床证据支持。临床研究发现，接受Enz治疗的CRPC患者具有更高的ARv7表达水平，ARv7变异体因为缺少配体结合域出现Enz耐药。但这一理论不足以解释所有CRPC患者Enz耐药现象，因为仅有30％的Enz耐药患者体内出现了ARv7变异，甚至部分ARv7阴性患者也出现了Enz耐药。有一些研究者认为其他类型的AR突变体如AR-F876、ARv9也与Enz耐药的发生有关。不过Enz耐药的完整发生机制还不清楚。

本申请的发明人偶然发现了一种AR的新突变体，这种突变体的编码基因多出了一个重复的外显子3，故将其命名为ARv33突变体。研究发现其与Enz 耐药的发生有关，因此对其进行检测具有重要的科研和临床意义。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种检测ARv33基因表达的引物。其技术方案如下：

一种检测ARv33基因表达的引物，其关键在于，包括上游引物 ARv33-forward和下游引物ARv33-reverse，其中ARv33-forward的序列为 GTGCGCCAGCAGAAATGATTG(SEQ IDNO:13)，ARv33-reverse的序列为 TCCGAAGACGACAAGATGGA(SEQ ID NO:14)。

本发明的目的之二在于提供一种检测ARv33基因表达的taqman探针。其技术方案如下：

一种检测ARv33基因表达的taqman探针，其关键在于该taqman探针的核酸序列为GGATGACTCTGGGAGGGAAACAGAAGT(SEQ ID NO:15)，在该核酸的5’末端连接有荧光报告基团，3’末端连接有荧光淬灭基团。

如上所述的taqman探针，所述荧光报告基团为FAM，所述荧光淬灭基团为MGB。

本发明的目的之三在于提供一种如上所述的引物或taqman探针的用途。

其技术方案如下：

如上所述的引物和/或如上所述的taqman探针在制备用于检测雄激素受体突变基因ARv33的mRNA的试剂盒中的应用。

本发明的目的之四在于提供一种检测ARv33基因表达的RT-PCR试剂盒。其技术方案如下：

一种检测ARv33基因表达的RT-PCR试剂盒，其关键在于，包括引物、 RT-PCR扩增缓冲液。

如上所述的检测ARv33基因表达的RT-PCR试剂盒，所述引物为上游引物ARv33-forward和下游引物ARv33-reverse。