[发明专利]与中华绒螯蟹抗鳗弧菌相关的SNP分子标记、引物对、筛选方法及应用在审
| 申请号： | 202111149509.9 | 申请日： | 2021-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN113637777A | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | 李凤梅;张慧 | 申请（专利权）人： | 青岛科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6809;C12N15/11 |
| 代理公司： | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人： | 袁晓玲 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 中华 绒螯蟹抗鳗 弧菌 相关 snp 分子 标记 引物 筛选 方法 应用 | ||
1.一种与中华绒螯蟹抗鳗弧菌相关的SNP分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID NO:3所示，且其第852位的碱基为T或C。
2.一种扩增权利要求1所述的SNP分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
3.权利要求1所述与中华绒螯蟹抗鳗弧菌相关的SNP分子标记的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)用鳗弧菌感染中华绒螯蟹后，提取基因组DNA，以SEQ ID NO:1所述的正向引物和SEQ ID NO:2所述的反向引物的引物对，以蟹基因组DNA为模板，扩增CatB基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
(b)设计如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物对，以步骤(a)中CatB基因为模板进行PCR扩增反应；
(c)经琼脂糖凝胶检测，对步骤(b)中目的条带清晰无杂带的PCR产物进行测序，筛选得到所述SNP分子标记。
4.根据权利要求3所述SNP分子标记的筛选方法，其特征在于，步骤(b)中，所述PCR扩增反应体系为：浓度均为10μM的所述正向引物和反向引物各1μL、所述CatB基因模板1μL，Taq酶0.2μL(1U),10×PCR缓冲液2.5μL，MgCl2(25mM)2.5μL，dNTP(10μM)2μL和ddH2O 14.8μL。
5.根据权利要求3所述SNP分子标记的筛选方法，其特征在于，步骤(b)中，所述PCR扩增反应的程序依次为：95℃预变性5min；94℃变性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s，共40个循环；72℃再延伸10min。
6.SEQ ID NO:3所述序列中的第852处的T/C突变的SNP位点在抗鳗弧菌中华绒螯蟹选育中的应用，所述应用的方式为以SEQ ID NO：3所述序列中的第852处的T/C突变位点为SNP位点，扩增鉴定中华绒螯蟹的基因型，筛选基因型为CC的中华绒螯蟹即为抗鳗弧菌中华绒螯蟹。
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