[发明专利]用于哺乳动物体系的嵌合型别构转录因子、调控元件组和诱导表达系统

权利要求书

1.一种用于对哺乳动物细胞中感兴趣的基因进行调控的嵌合型别构转录因子，所述嵌合型别构转录因子包含调控结构域以及转录激活结构域；其中，所述调控结构域选自于由RpaR、BjaR以及BraR所组成的组；所述转录激活结构域选自于P65、VP16、VP64、VTR1、VTR2以及VTR3；所述嵌合型别构转录因子以天然氨基酸衍生的酰基高丝氨酸内酯作为诱导剂；所述天然氨基酸衍生的酰基高丝氨酸内酯选自于由如下化合物所组成的组：对香豆酰基-高丝氨酸内酯(pC-HSL)、异戊酰基-高丝氨酸内酯(IV-HSL)以及肉桂酰基-高丝氨酸内酯(Cinn-HSL)。

2.如权利要求1所述的嵌合型别构转录因子，其中，所述转录激活结构域为VTR3；

优选地，所述调控结构域为RpaR，所述诱导剂为pC-HSL或Cinn-HSL；优选地，所述诱导剂为pC-HSL；

优选地，所述调控结构域BjaR，所述诱导剂为IV-HSL；

优选地，所述调控结构域为BraR，所述诱导剂为Cinn-HSL；

优选地，使用连接肽将所述调控结构域与所述转录激活结构域相连；优选地，所述连接肽的长度为20-60bp；优选地，所述连接肽具有SEQ ID NO：16的序列；

优选地，所述嵌合型别构转录因子进一步包含核定位信号肽，其中，所述核定位信号肽位于所述嵌合型别构转录因子的N端或C端、或位于所述调控结构域与所述转录激活结构域之间，所述核定位信号肽包含1-4个核定位序列；优选地，所述核定位序列的5’端和3’端各自独立地具有5-40bp的侧翼序列；优选地，所述核定位信号肽位于所述调控结构域与所述转录激活结构域之间；优选地，所述核定位信号肽包含2个核定位序列，所述核定位序列的5’端和3’端各自独立地具有5-20bp的侧翼序列；优选地，所述核定位序列具有SEQ ID NO：17的序列；

优选地，所述嵌合型别构转录因子进一步包含多聚化结构域，优选地，所述多聚化结构域为CarH；优选地，使用连接肽将所述调控结构域、所述多聚化结构域与所述转录激活结构域相连；优选地，所述连接肽各自具有20-60bp的长度；优选地，所述连接肽具有SEQ ID NO：16的序列；优选地，所述嵌合型别构转录因子进一步包含核定位信号肽，其中，所述核定位信号肽位于所述嵌合型别构转录因子的N端或C端、或者位于所述调控结构域与所述多聚化结构域之间、或者位于所述转录激活结构域与所述多聚化结构域之间，所述核定位信号肽包含1-4个核定位序列；优选地，所述核定位序列的5’端和3’端各自独立地具有5-40bp的侧翼序列；优选地，所述核定位信号肽包含2个核定位序列，所述核定位序列的5’端和3’端各自独立地具有5-20bp的侧翼序列；优选地，所述核定位序列具有SEQ ID NO：17的序列；优选地，所述核定位信号肽位于所述调控结构域与所述多聚化结构域之间、或者位于所述转录激活结构域与所述多聚化结构域之间；优选地，所述多聚化结构域的5’端和3’端进一步包含连接肽，优选地，所述连接肽的各自独立地具有20-60bp的长度；优选地，所述连接肽具有SEQ ID NO：16的序列；

优选地，所述哺乳动物细胞为人细胞；

优选地，所述哺乳动物细胞为永生化细胞、原代细胞或干细胞。

3.一种以天然氨基酸衍生的酰基高丝氨酸内酯作为诱导剂的调控元件组，所述天然氨基酸衍生的酰基高丝氨酸内酯选自于由如下化合物所组成的组：对香豆酰基-高丝氨酸内酯(pC-HSL)、异戊酰基-高丝氨酸内酯(IV-HSL)以及肉桂酰基-高丝氨酸内酯(Cinn-HSL)；所述调控元件组包含：

嵌合型别构转录因子，所述嵌合型别构转录因子包含调控结构域以及转录激活结构域；其中，所述调控结构域选自于由RpaR、BjaR以及BraR所组成的组；所述转录激活结构域选自于P65、VP16、VP64、VTR1、VTR2以及VTR3；以及

在哺乳动物细胞中具有活性的诱导型启动子，所述诱导型启动子包含核心序列以及与所述嵌合型别构转录因子相互作用的至少一对操纵位点对。