[发明专利]一种(S)-1-(4-氯苯基)-1,3-丙二醇的酶法生产方法

权利要求书

1.一种(S)-1-(4-氯苯基)-1,3-丙二醇的酶法生产方法，合成路线如下：

其中，R₁，R₂独立地选自C1-6的烷基。

2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，所述羰基还原酶具有对应于SEQ IDNO：2的氨基酸序列，或者对应于对应于SEQ ID NO：2的氨基酸序列存在下述突变之一或者两种以上的组合：45位的V突变为I(V45I)，63位的K突变为Q(K63Q)，141位的G突变为A(G141A)，141位的G突变为V(G141V)，195位的I突变为L(I195L)，204位的A突变为V(A204V)；

所述羰基还原酶突变体还包括以下范围：对以上突变体所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，进行一个或多个氨基酸的替换、缺失、改变、插入或增加，所得到的氨基酸序列；和/或对以上突变体所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，在序列的N端或C端进行一个或多个氨基酸的插入，所述插入的氨基酸残基个数为1-20个；优选1-10个，更优选1-5个。

3.根据权利要求2所述的生产方法，其特征在于，所述羰基还原酶突变体，是在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸序列存在下述突变之一：

(i)141位的G突变为A(G141A)，且195位的I突变为L(I195L)，其氨基酸序列如SEQ IDNo：4所示；

(ii)141位的G突变为V(G141V)，且195位的I突变为L(I195L)，其氨基酸序列如SEQ IDNo：6所示；

(iii)45位的V突变为I(V45I)；141位的G突变为V(G141V，I195L)，195位的I突变为L(I195L)，其氨基酸序列如SEQ ID No：8所示；

(iv)45位的V突变为I(V45I)，141位的G突变为V(G141V，I195L)，195位的I突变为L(I195L)，204位的A突变为V(A204V)，其氨基酸序列如SEQ ID No：10所示；

(v)45位的V突变为I(V45I)，63位的K突变为Q(K63Q)，118位的L突变为M(L118M)，141位的G突变为V(G141V，I195L)，204位的A突变为V(A204V)，其氨基酸序列如SEQ ID No：12所示；

所述羰基还原酶突变体还包括以下范围：对SEQ ID No:4、6、8、10、或12所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，进行一个或多个氨基酸的替换、缺失、改变、插入或增加，所得到的氨基酸序列；和/或

对SEQ ID No:4、6、8、10、或12所示的氨基酸序列在保持酶活性范围内，在序列的N端或C端进行一个或多个氨基酸的插入，所述插入的氨基酸残基个数为1-20个；优选1-10个，更优选1-5个。

4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

(S1)以间氯苯甲酸和醇R₁OH酯化反应得到间氯苯甲酸烷基酯IM01；

(S2)间氯苯甲酸烷基酯(IM01)在有机碱作用下和乙酸烷基酯CH₃COOR₂缩合，得到产物酮酸酯IM02；

(S3)以酮酸酯IM02为酶催化反应的底物，在羰基还原酶催化下，制备得到产物IM03；

(S4)IM03经过水解得到IM04；

(S5)IM04还原得到最终产物GL01，(S)-1-(4-氯苯基)-1,3-丙二醇。

5.根据权利要求4所述的生产方法，其特征在于，步骤(S1)中酯化反应在酸催化剂下，反应温度60-100℃，在加热回流条件下反应15-20h；优选地，间氯苯甲酸和R₁OH的的摩尔比为0.3-0.6：1。

6.根据权利要求4所述的生产方法，其特征在于，步骤(S2)中有机碱选自有机醇的钾盐和/或钠盐；IM01，酯CH₃COOR₂和有机碱的摩尔比为1：1.1-1.7：1.5-2.5，优选为1：1.3-1.5：1.8-2.2。