[发明专利]一种用于检测阿特拉津的检测制剂，其试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测阿特拉津的检测制剂，所述检测制剂包括胶体金试纸条和反应孔，所述胶体金试纸条包括样品垫、NC膜、吸收垫，所述NC膜上设置有T线和C线；其特征在于：

所述反应孔中冻干保存有阿特拉津单克隆抗体标记的胶体金；包被量为5～10μg/mL的阿特拉津单克隆抗体标记的胶体金30～80μL，优选为7μg/mL的阿特拉津单克隆抗体标记的胶体金50μL；

所述T线处包被有阿特拉津完全抗原，用于竞争结合所述阿特拉津单克隆抗体标记的胶体金；所述T线由T线抗原划线液制备而成，T线抗原划线液中0.5～2.0mg/mL的阿特拉津完全抗原；优选为1.5mg/mL；

所述C线处包被有羊抗小鼠抗体，用于捕获未结合的所述阿特拉津单克隆抗体标记的胶体金；所述C线由C线抗体划线液制备而成，C线抗体划线液中含有0.1～0.3mg/mL的羊抗小鼠抗体，优选为0.3mg/mL。

2.根据权利要求1所述的检测制剂，其特征在于：T线抗原划线液中含有质量百分比浓度为0.5～3％的PEG20000，优选为1％。

3.根据权利要求1所述的检测制剂，其特征在于：T线抗原划线液采用10～100mM的PB缓冲液配制而成，优选25～50mM的PB缓冲液；

更优选的，PB缓冲液的pH为6.2。

4.根据权利要求1所述的检测制剂，其特征在于：所述阿特拉津单克隆抗体标记的胶体金的制备方法：

S1、制备胶体金溶液；

S2、取OD值为1的胶体金溶液1mL，调整pH至8.5，加入7μg阿特拉津单克隆抗体，混匀，封闭，离心，加入抗体稳定液1mL，复溶沉淀，离心，最后加入100μL的抗体稳定液重悬；得到所述阿特拉津单克隆抗体标记的胶体金；

所述抗体稳定液的组成为：含有质量百分比浓度为0.05％PEG6000、质量百分比浓度为10％蔗糖的0.02M PB缓冲液，pH为6.2。

5.根据权利要求1所述的检测制剂，其特征在于：在S1中，采用采用1mL 1％柠檬酸钠与1mL 1％氯金酸制备胶体金溶液；

优选为：在沸水浴的容器中加入1％柠檬酸钠1mL，在搅拌状态下迅速加入1mL 1％氯金酸，待溶液变成酒红色后，撤去热源，继续搅拌；温度降至50℃左右停止搅拌，取胶体金用容量瓶定容至100mL。

6.根据权利要求5所述的检测制剂，其特征在于：所述划线液的流量均为1μL/cm，

优选的，划好的NC膜放入烘箱36～37℃条件下烘干4～8h。

7.一种用于检测阿特拉津的试剂盒，所述试剂盒中含有如权利要求1～6任一项所述的检测制剂，其特征在于，所述试剂盒中还含有样本处理液、阿特拉津标准溶液和样品稀释液；

所述样本处理液为体积百分比浓度为80％甲醇水溶液；

阿特拉津标准溶液中阿特拉津的浓度范围为0～200ng；

所述样品稀释液为PBS溶液，pH为6.2。

8.一种阿特拉津的检测方法，其特征在于，采用权利要求7所述的试剂盒进行检测，至少包括以下步骤：

S1、对待测样本加入所述样本处理液，得混合物；优选的，每1g待测样本加入1mL所述样本处理液；

S2、将所述混合物离心，取100μL上清，用所述样品稀释液稀释，得到待测液；

S3、在反应孔加入待测液100μL，35～38℃条件下孵育5～8min，将孵育得到的液体滴加于所述胶体金试纸条的样品垫上，通过手持式读卡器测定显色值。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，37℃条件下孵育6min后通过手持式读卡器测定显色值。

10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，

所述待测样本选自粮食作物制备的粉状物，所述粮食作物优选为玉米。