[发明专利]一种高效生产克拉酸的重组大肠杆菌及其应用

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌是以敲除了基因组上的脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ，同时敲除Lon蛋白编码基因lon及HNS调节蛋白编码基因hns的大肠杆菌为宿主细胞，过表达了UTP-1-磷酸葡萄糖尿苷酰转移酶编码基因galU和DNA结合转录激活因子RcsA编码基因rcsA。

2.如权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述脂多糖核心多糖合成基因簇waaL，waaU，waaZ，waaY，waaR，waaO，waaB，waaP，waaG，waaQ的NCBI登录号依次为948148，948147，948146，948145，948142，948143，948144，948150，948149，948155；所述lon的NCBI登录号为945085；所述hns的NCBI登录号为945829；所述galU的NCBI登录号为945730；所述rcsA的NCBI登录号为946467。

3.如权利要求1或2所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以Escherichia coli str K-12MG1655为宿主细胞。

4.如权利要求1～3任一所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌以pRSFDuet-1为表达载体。

5.一种利用葡萄糖发酵生产克拉酸的方法，其特征在于，所述方法为：采用权利要求1～4任一所述的重组大肠杆菌发酵制备得到。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，将所述重组大肠杆菌的种子液接种至发酵培养基中，进行发酵制备得到克拉酸；其中，所述发酵培养基包含：15～30g/L葡萄糖，35～45g/L Na₂HPO₄·12H₂O，1～8g/L NH₄Cl，2～4g/L KH₂PO₄，2～4g/L NaCl，0.01～0.05g/LCaCl₂和0.1～0.5g/L MgSO₄。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，将所述重组大肠杆菌的种子液在发酵培养基中的接种量OD₆₀₀为0.04～0.21。

8.如权利要求5～7任一所述的方法，其特征在于，将所述重组大肠杆菌的种子液接种至发酵培养基中，发酵条件为：25～37℃，150～250rpm。

9.权利要求5～8任一所述的方法制备得到的克拉酸。

10.权利要求1～4任一所述的重组大肠杆菌在制备含有克拉酸的产品中的应用。