[发明专利]一种木霉菌可湿性粉剂的制备方法

说明书

本发明提供一种木霉菌可湿性粉剂的制备方法，包括以下步骤：S1分生孢子悬浮液的制备、S2发酵基质的制备、S3分生孢子粉的制备、S4可湿性粉剂的制备，本发明确定了可湿性粉剂的组成比例为孢子粉20％、AB‑3 1％、分散剂NNO5％、抗坏血酸1％，经测定其润湿时间、质量悬浮率等方面均符合农药可湿性粉剂的相关标准，对T.brev T069产品的开发及工厂化生产具有重要意义，确定该菌株可湿性粉剂的组成，为生防T.brev T069的生产开发及田间应用与预评价奠定基础。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，特别涉及一种木霉菌可湿性粉剂的制备 方法。

背景技术

在我国传统的农业中，连作现象非常普遍，这会导致严重的连作障碍，即 土壤养分降低，病原菌大量积累，发病率和病害严重程度逐年升高，严重的影 响了作物的产量与品质。为了更好的控制病害，人们往往大量的使用农药化肥， 但效果并不明显。而且长期大量的使用化学药剂会严重的影响生态环境和人类 的健康^[1]，且易使病原菌产生抗药性，增加了对病害的防治难度。生物防治是一 种可替代化学农药的环境友好型病害防治方法，筛选出高效的生防菌株并将其 制成高效的生防制剂对推进农业绿色发展的有着重要作用。

木霉菌(Trichoderma spp.)是一种应用较为广泛的生防真菌，可通过竞争 作用、拮抗作用、重寄生作用等多种机制不同程度的抑制葡萄孢属(Botrytis spp.)、镰刀菌属(Fusarium spp.)和丝核菌属(Rhizoctonia spp.)等18个属的29种植 物病原真菌[3-4]。此外，木霉菌还可通过释放效应因子或分泌水解酶类诱导植 物的抗性，被广泛应用于种子包衣处理、土壤改良、叶面喷施等方面[5-6]。目 前，如何快速生产出大量的繁殖体并制成稳定可靠的制剂，是木霉菌生物防治 进一步推广应用的研究重点。

21世纪前，菌丝体、分生孢子、厚垣孢子这三种木霉菌繁殖体在生防制剂 的应用中早已开始研究。菌丝体抗逆性较差，存活率较低，厚垣孢子虽然储存 能力强，但培养条件苛刻，生长周期长。相比较之下，分生孢子生产快速简单， 同时对环境有较好的抗逆性，是目前商品化木霉制剂的主要类型。

发明内容

鉴以此，本发明提出一种木霉菌可湿性粉剂的制备方法，来解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种木霉菌可湿性粉剂的制备方法，包 括以下步骤：

S1、分生孢子悬浮液的制备：将菌株T.brev T069转接于PDA培养基上活 化培养，于20～30℃恒温培养7～11d出现大量绿色孢子，用无菌水冲洗孢子， 并稀释为0.8～1.2×10⁸CFU/mL的种子液备用；

S2、发酵基质的制备：收集木薯环剥后的皮，将其切成小片烘干，粉碎， 过10～100目的木薯皮渣，并混合均匀，称取木薯皮渣溶于水中，并装入组培瓶 中灭菌得到发酵基质；

S3、分生孢子粉的制备：将T.brev T069孢子悬浮液按照发酵基质的体积百 分比为0.3～1.2％的接种量加入到上述组培瓶中摇匀，于25～30℃恒温培养箱中静 置培养2～4d，其中第1～2d时将其取出摇匀以打断菌丝一次，之后将经过T.brev T069发酵后的木薯皮渣晾干后，用粉碎机粉碎3～8s，共粉碎1～3次，粉碎间隔 为3～7min，之后将其过300～400目筛，得到T.brev T069分生孢子粉；

S4、可湿性粉剂的制备：将上述孢子粉与湿润剂、分散剂、紫外保护剂、 载体混合制得可湿性粉剂，所述可湿性粉剂中包括以下质量百分比原料：孢子 粉12～25％、湿润剂0.9～1.3％、分散剂3～8％、紫外保护剂0.8～1.2％，余量为载 体。

进一步的，所述S1分生孢子悬浮液的制备：将菌株T.brev T069转接于PDA 培养基上活化培养，于28℃恒温培养9d可见大量绿色孢子，用无菌水冲洗孢子， 并稀释为1×10⁸CFU/mL的种子液备用。