[发明专利]一种与豆状囊尾蚴感染相关的血清循环miRNA标志物及应用有效
| 申请号： | 202111153408.9 | 申请日： | 2021-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN113862347B | 公开（公告）日： | 2023-05-26 |
| 发明（设计）人： | 骆学农;陈国梁;刘婷丽;李艳萍;白雪;王立群;刘晓雷;郭小腊 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京兴智翔达知识产权代理有限公司 11768 | 代理人： | 李琴 |
| 地址： | 730010 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 豆状囊 尾蚴 感染 相关 血清 循环 mirna 标志 应用 | ||
1.检测与家兔豆状囊尾蚴感染相关的血清循环miRNA标志物表达量的引物在制备用于家兔豆状囊尾蚴感染的分子检测试剂的应用，其特征在于，所述miRNA标志物为novel-miR-1，其序列为GCAGGUGCGAAAGCAGGUA，所述引物包括novel-miR-1的特异性引物：TATACGCAGGTGCGAAAGCAGG，所述引物还包括U6 snRNA的扩增引物F:GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT和R:CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT，
设计novel-miR-1的特异性引物：TATACGCAGGTGCGAAAGCAGG；以提取的血清miRNA为模板，用Mir-XTM miRNA First-Strand Synthesis Kit合成miRNA的cDNA第一链；再以novel-miRNA-1的特异性引物和通用的mRQ 3′引物制备如下qPCR反应体系：12.5 μl SYBRAdvantage Premix (2×), 2 µl cDNA, 0.5 µl ROX Dye (50×), 0.5 µl novel-miRNA-1引物，0.5 µl mRQ 3′引物和 9 µl无 RNase 水；反应条件如下：95 °C 10 min ，95 °C 15s, 60 °C 1 min，共40个循环；
以U6 snRNA作为内参基因，合成引物F: GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT和R:CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT， 用2−ΔΔCt方法计算novel-miRNA-1的相对表达水平。
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