[发明专利]一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞表面上通过化学键偶联JO蛋白，和或者在免疫细胞表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在免疫细胞上；

其中所述的连接剂为包含磷脂或磷脂类似物和活性基团的缀合物；所述免疫细胞中包含活性药物；

优选地，所述的免疫细胞选自T细胞、B细胞或巨噬细胞；

优选地，所述连接剂选自DMPE-PEG-NHS、DSPE-PEG-NHS、DPPE-PEG-NHS、DLPE-PEG-NHS、DMPE-PEG-OH、DSPE-PEG-OH、DPPE-PEG-OH、DLPE-PEG-OH、DMPE-PEG-COOH、DSPE-PEG-COOH、DPPE-PEG-COOH、DLPE-PEG-COOH、DMPE-NHS、DSPE-NHS、DPPE-NHS、DLPE-NHS、DMPE-OH、DSPE-OH、DPPE-OH、DLPE-OH、DMPE-COOH、DSPE-COOH、DPPE-COOH、DLPE-COOH以及类似的脂质中间体；

优选地，所述活性药物具有抗肿瘤作用的化学药物、蛋白、多肽、细胞因子或放疗制剂。

2.根据权利要求1所述的JO蛋白锚定的载药免疫细胞，其特征在于，所述化学键偶联JO蛋白的方法为将JO蛋白表面的羧基活化后与免疫细胞表面上的氨基或羟基进行偶联；

引入偶联JO蛋白的连接剂的方法为将连接剂与JO蛋白偶联后，将偶联物通过相似相容插嵌在免疫细胞的细胞膜上；

优选地，所述羧基活化所使用的活化剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)中的至少一种。

3.一种JO蛋白锚定的脂质体或纳米颗粒，其特征在于，所述脂质体或纳米颗粒表面上通过化学键偶联JO蛋白，或者在脂质体或纳米颗粒表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在脂质体或纳米颗粒上；

其中所述的连接剂为包含磷脂或磷脂类似物和活性基团的缀合物；

优选地，所述连接剂选自DMPE-PEG-NHS、DSPE-PEG-NHS、DPPE-PEG-NHS、DLPE-PEG-NHS、DMPE-PEG-OH、DSPE-PEG-OH、DPPE-PEG-OH、DLPE-PEG-OH、DMPE-PEG-COOH、DSPE-PEG-COOH、DPPE-PEG-COOH、DLPE-PEG-COOH、DMPE-NHS、DSPE-NHS、DPPE-NHS、DLPE-NHS、DMPE-OH、DSPE-OH、DPPE-OH、DLPE-OH、DMPE-COOH、DSPE-COOH、DPPE-COOH、DLPE-COOH以及类似的脂质中间体。

4.根据权利要求3所述的脂质体或纳米颗粒，其特征在于，所述脂质体或纳米颗粒还负载有活性成分；

优选地，所述活性成分为具有抗肿瘤作用的化学药物、蛋白、多肽、细胞因子或放疗制剂。

5.根据权利要求3或4所述的脂质体或纳米颗粒，其特征在于，引入偶联JO蛋白的连接剂的方法为将连接剂与JO蛋白连接后，将偶联物通过相似相容插嵌在脂质体或纳米颗粒表面或双分子层中；

所述化学键偶联JO蛋白的方法为将JO蛋白表面的羧基活化后与脂质体或纳米颗粒表面的氨基或羟基进行偶联；

优选地，所述羧基活化所使用的活化剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)中的至少一种。

6.权利要求1或2所述的JO蛋白锚定的载药免疫细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

1)采用活化剂对JO蛋白进行活化；或者通过连接剂先与JO蛋白连接，然后室温存放72小时-168小时进行稳定；

2)将活化后的JO蛋白与免疫细胞进行反应，使JO蛋白偶联在免疫细胞表面；或者将偶联连接剂的JO蛋白与免疫细胞进行反应，使偶联连接剂的JO蛋白嵌入免疫细胞膜表面；

3)分离纯化后将获得的免疫细胞与活性药物共同孵育，获得JO蛋白锚定的载药免疫细胞。