[发明专利]一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞及其制备方法和应用，具体公开了一种JO蛋白锚定的免疫细胞，所述免疫细胞表面上通过化学键偶联JO蛋白，和或者在免疫细胞表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在免疫细胞上；其中所述的连接剂为具有磷脂或磷脂类似物、聚乙二醇和活性基团的缀合物；所述免疫细胞中包含活性药物，所述的免疫细胞选自T细胞、B细胞或巨噬细胞。本发明证明JO蛋白对免疫细胞的促渗效果，将JO蛋白连接到免疫细胞，在实现JO促渗效果的同时，减少化药与JO蛋白连用时的给药次数。

技术领域

本发明属于生物领域，具体涉及一种JO蛋白锚定到脂质膜成份颗粒比如T细胞、巨噬细胞等细胞以及脂质体的制备方法和应用。

背景技术

由于细胞间连接的存在，如紧密连接，中间连接和桥粒，限制了分子量大于400道尔顿的药物在细胞间的渗透，这是实体瘤化疗效果差的一个重要原因。同时由于细胞间的连接进一步限制了免疫细胞如效应T细胞，NK细胞在实体瘤的杀伤效果，导致了CAR-T细胞疗法始终无法在实体瘤的治疗上取得突破。JO蛋白(junction opener)是在腺病毒感染上皮细胞的机制中被发现并优化的，其可以与桥粒的DSG2结合，从而重塑细胞间的紧密连接，在细胞间打开一个通道，便于药物及免疫细胞的进一步渗透。其被用于促渗剂可以显著提高金纳米粒在A549实体瘤中的聚集，提高化疗药物如顺铂，DOxil的治疗效果，克服肿瘤细胞的耐药性。同时Ines等人证明JO蛋白可以提高多克隆抗体药物对肿瘤的治疗效果。在上述应用中，JO蛋白被当作一种辅助剂，需要在正式开始化疗之前静脉注射，这些研究均集中在血液相关肿瘤或淋巴瘤中，还没有将其应用于实体瘤的渗透方面的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种简便的促渗策略，利用了细胞膜的磷脂双分子及多氨基的特点，通过EDC法或者一步法将JO蛋白修饰到T细胞及其他类型的细胞表面，实现了免疫细胞的渗透性能增加，同时化疗药物给药频次降低。

本发明一个方面提供了一种JO蛋白锚定的载药免疫细胞，所述免疫细胞表面上通过化学键偶联JO蛋白，或者在免疫细胞表面引入偶联JO蛋白的连接剂，将JO蛋白插嵌在免疫细胞上；

其中所述的连接剂为包含磷脂或磷脂类似物和活性基团的缀合物，所述免疫细胞中包含活性药物。

进一步地，所述活性药物在免疫细胞使用前，通过与免疫细胞共同孵育后内吞至免疫细胞内。

进一步地，所述的免疫细胞选自T细胞、B细胞或巨噬细胞。

进一步地，所述T细胞为人源性T细胞。

进一步地，所述化学键偶联JO蛋白的方法为将JO蛋白表面的羧基活化后与免疫细胞表面上的氨基或羟基进行偶联。

进一步地，引入连接剂的方法为将连接剂与JO蛋白偶联后，将偶联物通过相似相容插嵌在免疫细胞的细胞膜上。

进一步地，所述羧基活化所使用的活化剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)中的至少一种。

进一步地，所述连接剂选自DMPE-PEG-NHS、DSPE-PEG-NHS、DPPE-PEG-NHS、DLPE-PEG-NHS、DMPE-PEG-OH、DSPE-PEG-OH、DPPE-PEG-OH、DLPE-PEG-OH、DMPE-PEG-COOH、DSPE-PEG-COOH、DPPE-PEG-COOH、DLPE-PEG-COOH、DMPE-NHS、DSPE-NHS、DPPE-NHS、DLPE-NHS、DMPE-OH、DSPE-OH、DPPE-OH、DLPE-OH、DMPE-COOH、DSPE-COOH、DPPE-COOH、DLPE-COOH以及类似的脂质中间体。