[发明专利]一种奶牛乳房炎多联灭活疫苗及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种奶牛乳房炎多联灭活疫苗，其特征在于，其活性成分包括灭活后的大肠埃希氏菌、灭活后的5型金黄色葡萄球菌、灭活后的8型金黄色葡萄球菌、灭活后的336型金黄色葡萄球菌、灭活后的Ⅰa型无乳链球菌、灭活后的Ⅱ型无乳链球菌、灭活后的停乳链球菌、灭活后的乳房链球菌、灭活后的肺炎克雷伯氏菌、灭活后的化脓链球菌；

所述大肠埃希氏菌命名为大肠埃希氏菌EBM09菌株，于2013年12月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8532；

所述5型金黄色葡萄球菌命名为5型金黄色葡萄球菌SACP5菌株，于2018年6月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15908；

所述8型金黄色葡萄球菌命名为8型金黄色葡萄球菌SACP8菌株，于2018年6月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15907；

所述336型金黄色葡萄球菌命名为336型金黄色葡萄球菌SA336菌株，于2018年6月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15909；

所述Ⅰa型无乳链球菌命名为无乳链球菌SAWR-6菌株，于2013年12月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8533；

所述Ⅱ型无乳链球菌命名为无乳链球菌SAWR-9菌株，于2021年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22629；

所述停乳链球菌命名为停乳链球菌SDTR-9菌株，于2013年12月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8534；

所述乳房链球菌命名为乳房链球菌SURF-5菌株，于2013年12月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8535；

所述肺炎克雷伯氏菌命名为肺炎克雷伯氏菌KP-2菌株，于2021年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22627；

所述化脓链球菌命名为化脓链球菌SPHN-4菌株，于2021年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.22628。

2.根据权利要求1所述的一种奶牛乳房炎多联灭活疫苗，其特征在于，所述灭活后的大肠埃希氏菌、灭活后的5型金黄色葡萄球菌、灭活后的8型金黄色葡萄球菌、灭活后的336型金黄色葡萄球菌、灭活后的Ⅰa型无乳链球菌、灭活后的Ⅱ型无乳链球菌、灭活后的停乳链球菌、灭活后的乳房链球菌、灭活后的肺炎克雷伯氏菌、灭活后的化脓链球菌的浓度各自独立地为10⁸-10¹⁰个菌/mL。

3.根据权利要求1所述的一种奶牛乳房炎多联灭活疫苗，其特征在于，还包括佐剂，所述佐剂选自SP01-CpG佐剂、SP01佐剂、白油佐剂、铝盐佐剂中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的一种奶牛乳房炎多联灭活疫苗，其特征在于，所述CpG为牛CpG序列5’-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3’。

5.一种如权利要求1-4中任意一项所述的奶牛乳房炎多联灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)抗原原液的制备

大肠埃希氏菌、5型金黄色葡萄球菌、8型金黄色葡萄球菌、336型金黄色葡萄球菌、Ⅰa型无乳链球菌、Ⅱ型无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、肺炎克雷伯氏菌、化脓链球菌各自独立地经过发酵培养、灭活、离心、重悬得相应的抗原原液；

(2)疫苗的制备将大肠埃希氏菌抗原原液、5型金黄色葡萄球菌抗原原液、8型金黄色葡萄球菌抗原原液、336型金黄色葡萄球菌抗原原液、Ⅰa型无乳链球菌抗原原液、Ⅱ型无乳链球菌抗原原液、停乳链球菌抗原原液、乳房链球菌抗原原液、肺炎克雷伯氏菌抗原原液、化脓链球菌抗原原液混合均匀得混合液，所述混合液与佐剂混合乳化得所述奶牛乳房炎多联灭活疫苗。